Extracto
Antecedentes
La vía de señalización mTOR desempeña un papel crucial en la carcinogénesis del cáncer de células renales (CCR). Hemos tratado de investigar la influencia de las variaciones genéticas en los genes relacionados con la vía mTOR-sobre el riesgo de CCR.
Métodos
8 genotipo polimorfismos potencialmente funcionales en
AKT1
,
AKT2
,
PTEN
y
mTOR
genes utilizando el método TaqMan en un estudio de casos y controles de 710 pacientes con CCR y 760 sujetos sin cáncer. regresión logística incondicional, ajustado por posibles factores de confusión, se utilizó para evaluar las asociaciones de riesgo. A continuación, examinó la funcionalidad de los polimorfismos importantes.
Resultados
De los 8 polimorfismos, después de ajustar por múltiples comparaciones, se encontró una asociación significativa entre una variante (rs2295080) en el promotor de
mTOR Opiniones y redujo el riesgo de CCR (
P = 0,005
, OR = 0,74, IC del 95% = 0,59-0,91, TG /GG
vs.
TT). Otra variante (rs701848) en la región 3'UTR del
PTEN
se asoció con un mayor riesgo de RCC (
P = 0,014
, OR = 1,45, IC del 95% = 1,08-1,96, CC vs . TT); Sin embargo, la asociación no fue significativa después del ajuste para comparaciones múltiples. Asimismo, se observó
mTOR
niveles más bajos de ARNm en presencia del alelo rs2295080G en los tejidos renales normales. El ensayo indicador de luciferasa mostró que el alelo rs2295080G disminuyó significativamente la actividad de luciferasa. No se observó ninguna otra asociación significativa entre los polimorfismos seleccionados y el riesgo de CCR.
Conclusiones
Nuestros resultados sugieren que el funcional
mTOR
variante rs2295080 promotor afecta a la susceptibilidad de RCC mediante la modulación de la endógena
mTOR
nivel de expresión. Los efectos de riesgo y el impacto funcional de la
variante rs2295080 mTOR
necesitan validación adicional
Visto:. Cao Q, X Ju, Li P, Meng X, Shao P, Cai H, et al . (2012) una variante funcional en el
mTOR
Promotor modula su expresión y se asocia con el Riesgo de Cáncer Renal Cell. PLoS ONE 7 (11): e50302. doi: 10.1371 /journal.pone.0050302
Editor: Balraj Mittal, del Instituto Médico Sanjay Gandhi, India
Recibido: 26 Julio, 2012; Aceptado: October 18, 2012; Publicado: 28 Noviembre 2012
Derechos de Autor © 2012 Cao et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue apoyado por el Programa para el Desarrollo de Innovative Research Team en el primer hospital Afiliado de la Universidad médica de Nanjing, Programa de Iniciativa Provincial para la Excelencia Disciplinas de la provincia de Jiangsu, por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China [subvención número 81171963 y 81102089] y el de Ciencias Naturales Fundación de la provincia de Jiangsu [número de concesión BK2008473 y BK2011773]. Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el cáncer de células renales (CCR) es el tipo más común de cáncer de riñón, lo que representa más del 80% de todos los tumores malignos de riñón [1], [2]. Aunque la causa exacta de la RCC sigue siendo desconocida, la angiogénesis aberrante se considera una característica distintiva de esta enfermedad [3], [4]. En la mayoría de los casos de CCR esporádicos y hereditarios, la (VHL) gen supresor tumoral de von Hippel-Lindau es funcionalmente interrumpido y los resultados en la activación constitutiva del factor inducible por hipoxia (HIF) y la posterior inducción de genes diana, tales como VEGF [4] . Las variaciones genéticas en los genes relacionados con la angiogénesis se han sugerido para influir en la susceptibilidad de los individuos a RCC [5], [6], [7]. Recientemente, un gran estudio de asociación del genoma realizado en los Estados Unidos han identificado una variante interesante en
EPAS1 gratis (que codifica HIF-2 alfa) como un locus de susceptibilidad para el CCR en una población europea [7]. Sin embargo, en la población china que hemos evaluado, pero no hemos podido replicar los hallazgos significativos entre los polimorfismos en
HIF1A
[8], así como
EPAS1
[9] y el riesgo de CCR, que indica que existen diferencias en la arquitectura genética de los grupos étnicos, y la investigación de las variaciones genéticas en otros genes candidatos sigue siendo necesaria. En esto, en el presente estudio, hemos ampliado la exploración a una importante vía de señalización que comprende fosfoinositida-3-quinasa (PI3K), fosfatasa y tensina homólogo (PTEN), v-akt timoma murino viral homólogo de oncogén (AKT), y el objetivo de mamíferos rapamicina (mTOR).
La vía de señalización mTOR desempeña un papel crucial en el crecimiento celular, la supervivencia, la proliferación y la angiogénesis [10]. PI3Ks son activadas por receptores tirosina quinasas tales como el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), receptor vascular factor de crecimiento endotelial (VEGFR) y como la insulina-receptor del factor de crecimiento (IGFR); la activación a continuación, resulta en una cascada de quinasa a través de AKT y mTOR [11]. Esta vía está regulada negativamente por el gen supresor de tumor
PTEN
a través de la desfosforilación de trifosfato de fosfatidilinositol (PIP3) [12]. Las alteraciones genéticas de los genes relacionados con la vía mTOR-, incluyendo mutaciones de
PI3K
,
AKT
, y
PTEN
, facilitar la tumorigénesis y son comunes en los cánceres humanos [13], [ ,,,0],14], [15]. La relevancia de mTOR señalización en el CCR se destaca por el éxito en el uso de los inhibidores de mTOR (temsirolimus y everolimus) para el tratamiento de pacientes con enfermedad avanzada [16], [17].
polimorfismos de nucleótido único (SNPs) en candidato genes se han demostrado influir en la susceptibilidad de los individuos a RCC [7]. A la luz de la función crítica de la vía mTOR en el CCR, es posible que los SNPs en esta vía puede desempeñar un papel importante en el desarrollo de CCR. Sin embargo, ningún estudio publicado todavía ha abordado esta cuestión. En consecuencia, en el presente estudio, se revisaron 5 genes del núcleo (
PI3KCA
,
AKT1
,
AKT2
,
PTEN
, y
mTOR
) en esta vía y se analizaron 8 SNP potencialmente funcionales en estos genes y su impacto en la incidencia de CCR en una población china.
pacientes y métodos
declaración de Ética
el estudio fue aprobado por el Comité de Revisión Institucional de la Universidad de Medicina de Nanjing, Nanjing, china. Durante el reclutamiento, consentimiento informado por escrito se obtuvo de todos los participantes involucrados en este estudio.
Estudio de la población
En general, 710 pacientes con CCR incidentes y un grupo de 760 controles sin cáncer contratado en el primer afiliado del hospital de la Universidad de Medicina de Nanjing, Nanjing, china entre mayo de 2004 y septiembre de 2011 se inscribieron en el estudio de casos y controles. Los criterios de inclusión de los casos y controles se han descrito en otra parte [8]. En pocas palabras, todos los pacientes recién diagnosticados con estudio histopatológico confirmó RCC incidente y sin historia previa de otros tipos de cáncer o la quimioterapia o la radioterapia anterior fueron reclutados consecutivamente sin la restricción de la edad y el sexo. La enfermedad se clasifica de acuerdo con los criterios de la Organización Mundial de la Salud y por etapas de acuerdo con el Comité de América 2002 Conjunto sobre el Cáncer (AJCC) la clasificación TNM. Los controles fueron reclutados de los sujetos que buscaban un examen físico en los departamentos de pacientes ambulatorios en el hospital y fueron emparejados a los casos por edad (± 5 años) y sexo. Los controles sin cáncer estaban relacionados genéticamente con los casos y no tenían antecedentes de cáncer individuo. Antes de la contratación, un cuestionario común que se administra a través de entrevistas cara a cara por entrevistadores entrenados para recoger datos demográficos y factores relacionados. Cada paciente donó 5 ml de sangre venosa después de proporcionar un consentimiento informado por escrito. La tasa de respuesta para casos y controles fue superior al 85%
SNP selección
Se revisaron 5 genes esenciales implicados en la vía de señalización mTOR:.
PI3KCA
,
AKT1
,
AKT2
,
PTEN
y
mTOR
. Se seleccionaron los SNPs en estos genes sobre la base de datos de HapMap (http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/) y datos dbSNP (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/). Los polimorfismos potencialmente funcionales fueron identificados de acuerdo con los siguientes criterios: (1) situado en la 5 'flanqueantes, la región 5' no traducida (UTR), 3 'UTR, o regiones de codificación con cambios de aminoácidos; (2) la frecuencia menor alelo (MAF) & gt; 5% en la población china; o (3) asociado con el riesgo de cáncer en los estudios anteriores. De acuerdo con los criterios, se identificaron 8 SNPs, rs2494750 y rs2498786 incluidos en
AKT1
, rs33933140 y rs7254617 en
AKT2
, rs11202607 y rs701848 en
PTEN
así como rs2295080 y rs2536 en
mTOR
.
extracción de ADN y genotipado
ADN genómico fue extraído de la sangre periférica mediante digestión con proteinasa K y extracción con fenol-cloroformo. El genotipado de SNPs estos 8 se realizó utilizando TaqMan SNP genotipificación prediseñado ensayos (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.) en el Laboratorio del Departamento de Genética Molecular y Toxicología, Universidad de Medicina de Nanjing, Nanjing, China. Las secuencias de los cebadores y las sondas se enumeran en la Tabla S1. La mezcla de reacción de 10 l contenía 20 ng de ADN genómico, 3,5 l de 2 × TaqMan Genotipado Master Mix, 0,25 l de la mezcla de cebadores y sondas y 6,25 l de agua doblemente destilada. La amplificación se realizó bajo las siguientes condiciones: 50 ° C durante 2 min, 95 ° C durante 10 min seguido de 45 ciclos de 95 ° C durante 15 seg, y 60 ° C durante 1 min. Las amplificaciones y análisis se llevaron a cabo en los 384 pocillos ABI 7900HT real PCR System Time (Applied Biosystems) siguiendo las instrucciones del fabricante. software SDS 2.4 (Applied Biosystems) se utilizó para la discriminación alélica. Las tasas de genotipos de estos SNP estaban todos por encima de 98%. Para el control de calidad, 4 controles negativos se incluyeron en cada placa y 5% de las muestras se seleccionaron al azar para el genotipado repetido para la confirmación; y los resultados fueron 100% concordantes.
Análisis de
mTOR
la expresión del ARNm
Dieciocho extirpados quirúrgicamente los tejidos de cáncer renal con pareadas paratumor tejidos renales y un adicional de 24 paratumor renales tejidos eran utilizado para analizar
mTOR
niveles de mRNA
in vivo
. Los tejidos fueron tomadas de las muestras quirúrgicamente retirados de las pacientes y se almacenaron inmediatamente en nitrógeno líquido. El ARN se aisló a partir de 100 mg de tejido utilizando reactivo Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) y transcripción inversa en ADNc de cadena sencilla usando un cebador oligo (dT) y Superscript II (Invitrogen). El
mTOR
nivel de ARN se mide por cuantitativa en tiempo real de transcripción-PCR (RT) en el ABI Prism 7900 secuencia sistema de detección (Applied Biosystems, Foster City, CA, EE.UU.) revertir. La
ACTB
fue utilizado como un gen de referencia interna. Los cebadores utilizados para
mTOR
eran 5 '-TTGCTTGAGGTGCTACTG -3' (sentido) y 5'-CTGACTTGACTTGGATTCTG-3 '(antisentido) y los cebadores para
ACTB
fueron 5'-TGGCACCCAGCACAATGAA -3 '(sentido) y 5'-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3' (antisentido). La mezcla de reacción contenía 0,1 M de cada cebador, 2 × SYBR Green PCR Master Mix (Takara, Berkeley, CA, EE.UU.), y 1 l de cDNA (dilución 1:10). La amplificación se realizó bajo las siguientes condiciones: 95 ° C durante 30 s, y 40 ciclos de 95 ° C durante 15 s y 60 ° C durante 30 s. Cada reacción se realizó por triplicado.
Construcción de plásmidos promotor-reportero
Para construir el destino
mTOR
plásmidos promotor-reportero, se sintetizó el fragmento de ADN que contenía el rs2295080G alelo o el alelo T mediante la amplificación de la 998-pb (-617 a 381 de base con relación al sitio de inicio de transcripción)
MTOR
región promotora usando cebadores con sitios de restricción. Los cebadores fueron 5'-ACTTAGAGCTCAAACAGGGATGGGGCTGGGGGAGAGGGA-3 '(hacia delante) y 5'-ACTTAAGATCTCGAAACGTCTTTTGATGCAGTAATTCCT-3' (hacia atrás), y que incluyen los sitios de restricción SacI y NheI. Los productos de PCR resultantes se digirieron a continuación con SacI y NheI y se clonaron en el vector pGL3-Basic (Promega, Madison, WI, EE.UU.) que contiene el gen de luciferasa de luciérnaga como reportero. Las construcciones fueron confirmadas por secuenciación del ADN.
Las líneas celulares
El adenocarcinoma de células renales línea celular (786-o), 293 renales embrionarias humanas (células HEK-293) y líneas de células HeLa se amablemente proporcionados por el Dr. Z. Zhang (Departamento de genética Molecular y Toxicología, Escuela de Salud Pública, Universidad de Medicina de Nanjing, Nanjing, china) y se utilizaron como se informó anteriormente [18], [19].
La transfección y ensayos de reportero de luciferasa
786-o, las células HEK-293 y HeLa fueron sembradas en placas de cultivo de 24 pocillos. Después de 24 h, cada pocillo se transfectaron con 1 g de cada uno
MTOR
-Reporter plásmido utilizando Lipofectamine 2000 (Invitrogen). Como patrón interno, todos los plásmidos se cotransfectaron con 8 ng pRL-SV40, que contenía el gen de la luciferasa de Renilla. El vector pGL3-Basic sin un inserto se utilizó como control negativo. Cuarenta y ocho horas después de las transfecciones, las células se lisaron con el tampón de lisis pasiva (Promega) y se ensayaron para actividad de luciferasa utilizando el Sistema Dual-Luciferase reportero de ensayo (Promega). experimentos independientes se realizaron por triplicado para cada construcción de plásmido.
análisis estadísticos
Las diferencias en la distribución de las características demográficas, variables seleccionadas, y las frecuencias de los genotipos entre los casos y los controles fueron probados por la t de Student -test (para las variables continuas) o χ
2-test (para las variables categóricas). SNP frecuencias de alelos en los participantes de control se ensayaron frente a la salida de equilibrio de Hardy-Weinberg por un χ
2-prueba de bondad de ajuste antes de su posterior análisis. Las asociaciones entre los polimorfismos y el riesgo de CCR se estimaron mediante el cálculo de la odds ratio (OR) y los intervalos de confianza del 95% (IC) a partir del análisis de regresión logística incondicional con el ajuste por factores de confusión posibles. Se utilizó la tasa de falso descubrimiento (FDR), basado en el método de Benjamini-Hochberg para ajustar el
P valor
para comparaciones múltiples. Las asociaciones se consideraron estadísticamente significativas cuando se ajustó-FDR
Los valores P
eran menos de 0,05. Las diferencias en la expresión del gen indicador de luciferasa entre las diferentes construcciones del promotor, así como ARNm y los niveles de proteína de tumor renal o tejidos normales que llevan diferentes genotipos se evaluaron mediante la prueba t de Student o el análisis unidireccional de la varianza (ANOVA), y
P Hotel & lt; 0,05 se consideró estadísticamente significativa. Todos los análisis se realizaron con el programa SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, EE.UU.) con dos lados
P
valores.
Resultados
Características de los CCR los pacientes y los controles
la distribución de frecuencias de las características seleccionadas de los 710 casos y 760 controles se muestran en la Tabla 1. No hubo diferencias significativas entre los casos y los controles con respecto a la edad, sexo, estado IMC y beber ( todos
P Hotel & gt; 0,05). Sin embargo, había más fumadores, pacientes con hipertensión y diabetes entre los casos que entre los controles (
P = 0,035
, y lt; 0,001 y & lt; 0,001, respectivamente). De 710 pacientes, el 62,8% de los pacientes se encontraban en estadio I, mientras que el 19,6, el 7,3 y el 10,3% se encontró que tenían la etapa II, III y IV enfermedades, respectivamente. El porcentaje de grado nuclear de I a IV fue de 19,2, 48,0, 24,5 y 8,3, respectivamente.
Genotipo y frecuencias de los alelos de
AKT1
/
AKT2
/
PTEN
/
mTOR
polimorfismos y RCC riesgo
las asociaciones entre estos polimorfismos y el riesgo de CCR en el mejor modelo genético se presentan en la Tabla 2 y genotipo distribuciones detalladas de los polimorfismos son presentados Tabla 3. las frecuencias genotípicas de estos 8 SNPs en todos los controles se ajustaban a Hardy-Weinberg. El SNP más significativo asociado con el riesgo de CCR fue rs2295080, que se encuentra en la región promotora del
mTOR
. En comparación con los individuos portadores del genotipo rs2295080TT, las personas con el TG y los genotipos /GG TG se asociaron con un menor riesgo de CCR (
P = 0,021
, OR = 0,81, IC del 95% = 0,68-0,97 y
P = 0,005
, OR = 0,74, IC del 95% = 0,59-0,91, respectivamente). La asociación entre rs2295080 y el riesgo de CCR siguió siendo significativa después del ajuste para comparaciones múltiples (FDR = 0,040). Además de este SNP, la variante homocigoto (CC) de otro SNP (rs701848), que se encuentra en la región 3'UTR del
PTEN
también se asoció significativamente con un mayor riesgo de RCC (
P
= 0,014, OR = 1,45, IC del 95% = 1,08-1,96). Sin embargo, esta asociación se mantuvo sólo marginalmente significativa después del ajuste para comparaciones múltiples (FDR = 0,056). Desde PTEN regula negativamente la mTOR vía de señalización, que luego investigó si hubo interacción entre los
mTOR
rs2295080 y
PTEN
rs701848 para influir en el riesgo de RCC, sin embargo, como se muestra en la Tabla 4, no significativa se observó una interacción (
P
interacción = 0,118), aunque los individuos con ambos genotipos de riesgo (TT rs2295080 y rs701848 CC) tenían un riesgo significativamente mayor de 1,72 RCC. A medida que el
mTOR
rs2295080 produce la mejor señal de asociación entre el polimorfismo seleccionado, que se centró en que en los experimentos funcionales posteriores.
Expresión de
mTOR
en el RCC y las asociaciones entre los
mTOR
rs2295080 y
mTOR
expresión
a continuación, explorar la expresión de
mTOR Hoteles en RCC y la asociación entre el polimorfismo rs2295080 y
mTOR
expresión en los tejidos renales paratumor utilizando cuantitativa en tiempo real RT-PCR. Como se muestra en la Figura 1A, el
MTOR
nivel de expresión en los tejidos tumorales era significativamente más alta que en los tejidos normales adyacentes (
P
= 0,018). Además, en comparación con los individuos portadores del genotipo TT, individuos portadores del alelo G (TG y GG genotipos) tenían niveles más bajos de
mTOR
expresión (
P = 0,003
y 0.011 para los TG
vs TT y GG
vs.
TT, respectivamente) (fig. 1B). Estos resultados sugieren que la sobreexpresión de
MTOR
puede contribuir a la carcinogénesis renal y que rs2295080, situada en el
MTOR
promotor, puede estar implicado en la carcinogénesis renal mediante la regulación de la actividad y la expresión transcripcional niveles de
mTOR
.
(a) Distribución y comparación de
mTOR
expresión en carcinomas y tejidos normales adyacentes (
P = 0,018
). (B) Asociación entre la
mTOR
expresión en tejidos renales y
mTOR
genotipos rs2295080. El
mTOR
genotipo TT rs2295080 se asocia con la expresión significativamente mayor que la mTOR
mTOR
rs2295080 TG (
P
= 0,003) y GG (
P
= 0,011) genotipos.
caracterización funcional de
mTOR
rs2295080
Para examinar si la variación es significativa funcionalmente mediante la alteración de la
mTOR
promotor actividad, se genera entonces reportero construcciones genéticas que contienen ya sea el G rs2295080 o alelo T y transfectadas HEK293, 786-S y líneas de células HeLa con los plásmidos informadores. Como se muestra en la Figura 2, la construcción que contiene el alelo rs2295080G condujo un expresión del gen indicador significativamente menor en comparación con la que contiene el alelo rs2295080T en estas líneas celulares. Estos resultados indican que el alelo rs2295080G en la región promotora había una actividad transcripcional del
mTOR
reducida.
(A) Representación esquemática de plásmidos informadores que contienen los
mTOR
rs2295080 T o G alelo, que se insertó aguas arriba del gen informador de luciferasa en el plásmido pGL3-Basic. (B) el 2 construcciones se transfectaron transitoriamente en las células Hela HEK-293, 786-o y, respectivamente. Todos los constructos se cotransfectaron con pRL-SV40 para normalizar la eficiencia de transfección. Los valores son medias ± SD de más de 3 experimentos independientes que fueron cada uno realizado por triplicado.
Discusión
En el estudio preestablecido, se investigó la asociación entre polimorfismos 8 potencialmente funcionales en el señalización de los genes relacionados con la susceptibilidad a rutas y CCR en una población china mTOR. Nuestro estudio sugiere que la variante rs2295080 en la región promotora de
mTOR
se asoció con una disminución del riesgo de CCR. Los resultados de los estudios de asociación de rs2295080 fueron confirmadas posteriormente por su posterior análisis funcional de la variante. En primer lugar, observamos que el
mTOR
nivel de ARNm se redujo en los individuos que llevaban el alelo rs2295080 G
in vivo
. Luego, en los
in vitro
ensayos, se encontró que el alelo rs2295080 G disminuyó significativamente la actividad transcripcional de
mTOR
. Estos resultados sugieren que los
mTOR
rs2295080 es un SNP funcional. A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio para evaluar el papel de los polimorfismos de genes relacionados con la señalización mTOR vía-en la incidencia de CCR
.
Estos hallazgos son biológicamente plausible, especialmente a la luz de las funciones cruciales de la vía de mTOR en la muerte celular y la supervivencia. Durante la activación de mTOR se ha considerado una característica en RCC, aunque si la activación por encima de mTOR surge de una mayor expresión de la proteína o por fosforilación de la proteína mTOR parece vago [20], [21]. Dada la importancia del papel de mTOR, sería de esperar que un mayor nivel de expresión de la proteína total de mTOR puede facilitar la carcinogénesis renal, que es apoyado por varios estudios que investigan la expresión de
mTOR Hoteles en líneas de células renales [21] y en especímenes nefrectomía RCC [22]. En nuestro estudio, también se observó que el nivel de ARNm de
mTOR
fue significativamente mayor en el tejido RCC que en los tejidos renales paratumor, que proporcionan más evidencia de un papel causal de la
mTOR
expresión en RCC. La sobreexpresión de la
MTOR
También se ha sugerido que es un factor de mal pronóstico en varios cánceres humanos, incluyendo [22], cáncer de pulmón [23], cáncer de mama [24], de laringe carcinoma de células escamosas [25 RCC ] y el tracto biliar adenocarcinoma [26]. Teniendo en cuenta el papel de mTOR para facilitar el desarrollo y progresión del cáncer, los niveles reducidos de mTOR debido a la variante rs2295080 en el promotor puede disminuir la susceptibilidad al cáncer, lo que puede explicar nuestros hallazgos en los estudios de asociación.
Además, el
PTEN
polimorfismo rs701848 se asoció marginalmente con un mayor riesgo de CCR tras el ajuste para comparaciones múltiples. Cabe señalar que este polimorfismo se encuentra en la región 3 'UTR de
PTEN
; Por lo tanto, es biológicamente plausible que este SNP podría alterar
PTEN expresión
al influir en la estabilidad del mRNA, y luego influir en la susceptibilidad al cáncer. Sin embargo, la función de la hipótesis de este SNP aún debe ser investigado en estudios futuros. Desde la activación de la señalización de mTOR está regulada negativamente por
PTEN
, sería interesante ver si hay un efecto de interacción entre los
mTOR
rs2295080 y los
PTEN
rs701848 polimorfismos. Sin embargo, no se encontró una interacción significativa entre estos 2 SNPs, aunque los individuos con los genotipos de riesgo de ambos de los dos SNPs (rs2295080 y rs701848 TT CC) tenían un riesgo significativamente mayor de 1,57 RCC.
Hasta ahora , varios agentes diana molecular, como el sunitinib inhibidor de la tirosina quinasa, los VEGFR inhibidor de pazopanib, y la mTOR los inhibidores temsirolimus y everolimus, han sido aprobados para el tratamiento de pacientes con CCR avanzado. Más recientemente, Xu
et al.
Demostró que los polimorfismos genéticos en los genes de la angiogénesis y relacionadas con la exposición podían predecir la respuesta al tratamiento con la monoterapia con pazopanib en pacientes con CCR [27]. Además, también hay evidencias que sugieren que los polimorfismos genéticos en genes implicados en la farmacocinética de sunitinib están asociados con la supervivencia libre de progresión (SLP) en pacientes tratados con sunitinib mRCC [28]. Cabe señalar que el
MTOR
rs2295080 polimorfismo se ha sugerido que se asocia con resultados clínicos en pacientes con cáncer de esófago tratados con quimioterapia [29]. Sin embargo, todavía hay una falta de estudios de investigación de la variabilidad genética hereditaria en la respuesta al tratamiento de inhibidores de mTOR. Teniendo en cuenta el papel funcional del polimorfismo rs2295080 en la modulación de la expresión de
MTOR
, este polimorfismo puede ser un marcador genético prometedor para investigar con respecto a la predicción de la respuesta al tratamiento con temsirolimus o everolimus. Sin embargo, la falta de información disponible acerca de estos medicamentos en tratamientos de nuestros pacientes con CCR restringe nuestro estudio para abordar esta cuestión; por lo tanto, instamos a su investigación en otros estudios que se centran en el tratamiento de pacientes con CCR.
En conclusión, nuestros resultados sugieren que el
mTOR
rs2295080 influye en la susceptibilidad RCC en nuestra población china. Nuestro estudio también pone de manifiesto que el
mTOR
variante rs2295080 puede afectar a la susceptibilidad de RCC mediante la modulación de la
mTOR
nivel de expresión endógena. Además, los resultados de nuestro estudio plantean algunas preguntas importantes sobre, por ejemplo, si el nivel de expresión distinta de
mTOR
inducida por el polimorfismo rs2295080 influirá en el nivel de fosforilación de mTOR y luego alterar su señal descendente, y si este polimorfismo tiene un efecto en el pronóstico RCC y la respuesta de los pacientes de RCC al tratamiento con temsirolimus y everolimus. Futuros estudios con un diseño más amplio y más información disponible acerca de estos tratamientos farmacológicos pueden ayudar a responder a estas preguntas.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
Las secuencias de los cebadores y sondas usados en el presente estudio.
doi: 10.1371 /journal.pone.0050302.s001 gratis (DOC)