Extracto
del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) inhibidores de tirosina quinasa (TKI), tales como gefitinib, se han demostrado de manera eficiente inhibir la proliferación de un subconjunto de cánceres de pulmón de células pequeñas (NSCLC) no. Desafortunadamente, la mayoría de NSCLC que expresa EGFR de tipo salvaje es principalmente resistentes al tratamiento EGFR-TKI. Aquí, se muestra que la proliferación de las líneas celulares NSCLC gefitinib resistente H460 y A549 se reduce por la pequeña molécula SecinH3 que atenúa la activación del EGFR indirectamente por la inhibición de cytohesins, una clase de activadores del EGFR descubierto recientemente citoplasmáticos. SecinH3 y gefitinib mostraron un efecto antiproliferativo sinérgico, que se correlaciona con una profunda inhibición de la activación de Akt y la expresión de survivina. El tratamiento de los ratones con xenotrasplantes H460 con SecinH3 mostraron el efecto antiproliferativo y pro-apoptótica de SecinH3 in vivo. Nuestros datos sugieren que la orientación del EGFR indirectamente mediante la inhibición de sus activadores citoplasmáticos, los cytohesins, tiene el potencial de mejorar el tratamiento de la EGFR-TKI principalmente los cánceres de pulmón resistentes
Visto:. Bill A, Schmitz A, K König, Heukamp LC, Hannam JS, Famulok M (2012) Efecto antiproliferativo de cytohesin inhibición en células resistentes a gefitinib del cáncer de pulmón. PLoS ONE 7 (7): e41179. doi: 10.1371 /journal.pone.0041179
Editor: Anna Maria Delprato, Proyecto BioScience, Estados Unidos de América
Recibido: 15 de mayo de 2012; Aceptado: 18 Junio 2012; Publicado: 18 Julio 2012
Derechos de Autor © 2012 Bill et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo fue financiado por la Deutsche Forschungsgemeinschaft y la colaboración Reseach Center 645 (SFB 645). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses: Dra. Schmitz y el Dr. Famulok son copropietarios de una patente de molécula pequeña cytohesin inhibidores de titulado "El uso de inhibidores de la longevidad cytohesin químicamente inducción" (WO2008058995, US 20100048594). El Dr. Famulok es co-inventor en una solicitud de patente titulada "inhibidores cytohesin" (solicitud de patente europea EP2286808 (WO2006053903). Esto no altera la adhesión de los autores a todos los PLoS ONE políticas sobre los datos y compartir materiales.
Introducción
la introducción del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) inhibidores de tirosina quinasa (TKI) en la terapia del cáncer de pulmón no de células pequeñas (NSCLC) que soporta la activación de mutaciones del EGFR se ha desplazado el paradigma de tratamiento de una quimioterapéutico a un enfoque específico. Desafortunadamente, sólo el 20 por ciento de los adenocarcinomas del oso de pulmón activación de mutaciones de EGFR y son sensibles a la terapia EGFR. por otra parte, los pacientes bajo terapia de TKI EGFR desarrollar resistencia secundaria durante el tratamiento. las mutaciones en el juego de EGFR un papel decisivo en la respuesta del tumor a la terapia EGFR. la activación de mutaciones, en particular, en los exones 19 y 21, son predictivos de una respuesta inicial favorable a EGFR-TKI [1], [2], [3]. Por el contrario, la mutación de la llamada posición gatekeeper en el bolsillo de unión de ATP del dominio quinasa de EGFR, es decir, la sustitución de la treonina 790 por la metionina, hace que las células resistentes a [4], [5], [6]. La mutación gatekeeper es la causa más común para el desarrollo de resistencia secundaria de los tumores que responden. La mayoría de NSCLC expresan EGFR de tipo salvaje y son, por lo tanto, sobre todo resistente a EGFR-TKI [7]. Alrededor del 25% de estos NSCLCs soportar una forma mutada de la Ras proto-oncogen, G61H KRas o G12V, y la presencia de esta mutación es un indicador casi inconfundible de la resistencia a la terapia EGFR [8]. Sin embargo, los estudios in vitro utilizando siRNA mediada por derribo del EGFR indican que la proliferación de células de NSCLC que expresan EGFR de tipo salvaje y el cojinete mutado KRas todavía depende en cierta medida de la EGFR [9] [10], [11, ], [12] lo que sugiere que las células resistentes a EGFR-TKI no son totalmente independientes del EGFR y que, por lo tanto, la orientación del EGFR por medios distintos de TKIs podría conducir a la proliferación reducida incluso en las células resistentes a EGFR-TKI. Aquí, se muestra que el tratamiento con líneas celulares de NSCLC que expresan SecinH3 de tipo salvaje EGFR atenúa la activación del EGFR y la señalización, reduce la proliferación de las células in vitro e in vivo, y los hace sensibles a la gefitinib EGFR-TKI. Como SecinH3 inhibe activadores EGFR citoplasmáticos de la familia cytohesin [13] nuestros datos sugieren que la orientación del EGFR indirectamente por inhibición de sus activadores puede representar un enfoque prometedor para el desarrollo de terapias dirigidas a EGFR para la mayoría de NSCLC que no expresan EGFR mutante.
Materiales y Métodos
Materiales
SecinH3, Secin16 y XH1009 se sintetizaron como se describe [14], [15], fue comprado a gefitinib Biaffin. H460 y células A549 fueron de ATCC y se cultivaron en RPMI1640 (PAA) con suero de ternera fetal 10% (Lonza). La identidad de las líneas celulares se verificó al final del periodo experimental basado en la genotipificación de microsatélites por la línea celular ECACC Servicio de Verificación de Identidad. Los perfiles STR ajustan a los perfiles de las líneas celulares que depositó en el ATCC y bases de datos ECACC STR.
Ensayo de proliferación
3 × 10
3 células por 96 pocillos se sembraron en un claro, placa de fondo plano de 96 pocillos (TPP). Después de 24 h las células se trataron con las concentraciones indicadas de los inhibidores o disolvente (concentración final de DMSO 0,4%) en RPMI que contenía 50 ng /ml de EGF o IGF-1 (Peprotech), respectivamente. El medio se cambió al día durante 3 días y la proliferación celular se analizó con un 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio (MTT) ensayo (Promega) como se describe en el protocolo del fabricante utilizando un Varioscan lector de microplacas (Thermo Scientific). Todos los ensayos se realizaron al menos por triplicado. Para el cálculo de la tasa de proliferación relativa, absorbancia en las células tratadas con DMSO se estableció como la media 1.
Formación de Colonias Ensayo
ensayos de crecimiento clonogénicos se realizaron como se describe [16]. Brevemente, 3000 células /pocillo se sembraron en placas de seis pocillos, se dejaron adherir durante la noche y tratados con las concentraciones indicadas de compuesto o DMSO durante 72 h. Las células se desalojaron, replated en placas de seis pocillos y se cultivaron durante 7 a 10 días en medio de crecimiento normal. Las colonias se tiñeron con 0,1% de Coomassie, ácido acético 10%, metanol al 30% en PBS y se analizaron usando un Odyssey infrarrojo cercano escáner (LI-COR Biosciences).
Tumor Xenograft
Todos los animales procedimientos fueron realizados de acuerdo con las leyes alemanas de protección de los animales y fueron aprobados por el comité de protección de animales local y las autoridades locales (Bezirksregierung Köln, Alemania). Los tumores se generaron por s. do. Las inyecciones de 5 × 10
6 H460 células en ratones nu /nu atímicos macho. Después de ratones establecimiento tumorales fueron asignados al azar en dos grupos, control (vehículo) y los ratones tratados con SecinH3. Los ratones se trataron por i diaria. pag. inyecciones (100 l SecinH3 2,5 mM en 50% /solución de glucosa isotónica DMSO al 50% o vehículo solamente). El volumen del tumor se midió diariamente y se calcula mediante la fórmula:
D
L =
mayor diámetro;
D
S
= diámetro más pequeño.
El ensayo de TUNEL se realizó de acuerdo al manual del fabricante del (ApopTag Plus de peroxidasa In Situ Apoptosis kit, Merck Millipore).
escindido expresión de caspasa 3 se determinó por inmunohistoquímica en formalina fijo y secciones de tejidos embebidos en parafina utilizando un anticuerpo específico para la caspasa 3 escindida (1:750, Cell Signaling Technology) después de la recuperación de antígeno a pH 6 como se describe [17].
a, estructuras de los inhibidores utilizados en este estudio. B - C, la proliferación de A549 (B) y las células H460 (C) se determinó mediante el ensayo de MTT en presencia de los inhibidores indicados. ***, P & lt;. 0.001 respecto a las células tratadas con DMSO
inmunotransferencias
Las células se privaron de suero durante la noche en presencia del inhibidor indica o DMSO (concentración final de DMSO 0,4 %). El medio y los inhibidores se actualizan 1 h antes de la estimulación. La estimulación fue de 5 min con 50 ng /ml de EGF o IGF-1, respectivamente. Las células se lisaron en tampón de lisis (20 mM Tris-Cl, pH NaCl 7,5 /150 mM /1 mM EDTA /EGTA 1 mM de pirofosfato de sodio /2,5 mM /vanadato de sodio /1 mM 1 mM β-glicerofosfato /1% de Triton X-100 ) suplementado con inhibidores de la proteasa-mezclar HP (Serva). cantidades normalizadas de proteína se separaron por 6% de SDS-PAGE y se transfirieron a nitrocelulosa. Se utilizaron los siguientes anticuerpos: pAkt (Thr473) (Cell Signaling Technology), pEGFR (Tyr1086) (Epitomics), pIRS1 (Tyr612) (Life Technologies), EGFR, survivina, p27 (SantaCruz Biotechnology), Hsc70 (Enzo Life Sciences). La detección se realizó en un escáner Odyssey usando anticuerpos secundarios marcados-DyLight800 (Thermo Scientific)
A -. B, la proliferación de las células H460 en presencia de gefitinib o SecinH3 solo o en la combinación se determinó mediante el ensayo de MTT ( A) o por el ensayo de formación de colonias (B). En A los números dan el valor relativo de la proliferación con células no tratadas establecidos como 1. La proliferación suponiendo un efecto aditivo de SecinH3 y gefitinib (esperado) se compara con el valor encontrado en los experimentos (observado). Los valores observados por debajo de los valores esperados indican sinergismo
A -. C, H460 células fueron tratadas durante la noche con 1 gefitinib M, 15 M SecinH3 o su combinación. A, la expresión de p27Kip y survivin se analizó mediante transferencia de western. B, C, evaluación estadística de los datos de transferencia Western se muestran en A. ** en B indica p & lt; 0,01 en relación con los controles tratados con DMSO, así como a las células gefitinib tratada. *** En C indica p & lt; 0,001 en relación con los controles tratados con DMSO. n = 3.
A - D, las células privadas de suero fueron estimuladas con EGF durante 5 min y se sondearon por Western blot para la activación de las proteínas indicadas. A, Western blot representativo. B - D, Evaluación estadística de la fosforilación de EGFR (B), IRS1 (C), y Akt (D) en las células H460 estimulada por EGF en presencia de gefitinib, SecinH3, o una combinación de ambos inhbitors. p indica la forma fosforilada, es decir, se activa, de la proteína. Las señales se normalizaron para el control de carga Hsc70. Las barras de error dan el error estándar. *, P & lt; 0,05, ** p & lt; 0,01, ***, p & lt; 0,001 en relación con las células tratadas con EGF con excepción de las comparaciones que son especificados por soportes
Estadísticas
los resultados se dan como la media ± error estándar de la media (SEM). Los análisis estadísticos se realizaron con Prism (GraphPad Software) la aplicación de un modelo lineal con Tukey post-test para los experimentos in vitro y la prueba t para los xenoinjertos. Las diferencias de medias se consideraron significativas a un nivel de significación de 0,05.
Resultados
Las células de NSCLC que expresan de tipo salvaje EGFR Responder a SecinH3
A pesar de que las células NSCLC que expresan EGFR de tipo salvaje no responden a concentraciones clínicamente relevantes de su EGFR-TKI proliferación parece depender en cierta medida de la señalización del EGFR como se ha demostrado mediante experimentos de EGFR desmontables [9], [10], [11], [12]. Por lo tanto, nos preguntamos si la proliferación de la línea celular A549 NSCLC, que expresa EGFR de tipo salvaje y KRas con la activación de la mutación G12S se vio afectada por el tratamiento de las células con SecinH3 (fig. 1A). SecinH3 es un inhibidor cytohesin [14], [15] y no inhibe la actividad de la tirosina quinasa del EGFR directamente [13]. Cytohesins durante mucho tiempo han sido conocidos como factores de intercambio de nucleótidos de guanina para las proteínas G pequeñas de la familia ARF [18], pero recientemente se ha demostrado que contribuir a la activación de EGFR [17]. El mecanismo de la activación de EGFR cytohesin mediada, que es aún desconocido en detalle, implica la interacción directa de cytohesins con EGFR, es ARF-independiente, y puede ser inhibida por SecinH3. Cuando las células A549 se trataron con SecinH3 o el inhibidor de cytohesin relacionada Secin16 [19] se observó una reducción dependiente de la concentración en la proliferación (Fig. 1B). En comparación con las células PC9 altamente adicto EGFR que expresan un EGFR que lleva una deleción en el exón 19 [20], la proliferación de que fue completamente inhibida a 15 M SecinH3 [17], la reducción de la proliferación fue menos pronunciado en las células A549 que está de acuerdo con la menor dependencia de las células A549 sobre la señalización EGFR. La inhibición no se observó en las células tratadas con el compuesto XH1009 de control que está estructuralmente relacionada con SecinH3 pero no inhibe cytohesins [14]. Gefitinib utilizado a la concentración terapéutica de 1 M sólo marginalmente inhibe la proliferación de células A549. La actividad de la gefitinib utilizado fue verificada por el tratamiento de la línea celular sensible a gefitinib PC9 [20] donde 100 nM gefitinib inhibe la proliferación de células casi completamente (datos no mostrados). Para excluir que el efecto de SecinH3 estaba restringida a células A549 Se repitieron los experimentos en células H460, una línea celular de NSCLC que expresa también de tipo salvaje EGFR pero un KRas mutante diferente, a saber G61H (Fig. 1C). Al igual que en las células A549, 15 mM SecinH3 dio como resultado aproximadamente 50% de reducción de la proliferación. Este valor se ajusta razonablemente bien a la concentración inhibitoria media máxima de SecinH3 para la actividad catalítica de cytohesins purificados que es de 10-12 M [14].
SecinH3 y gefitinib son sinérgicos
Después de haber demostrado SecinH3 que atenúa la proliferación de células de NSCLC gefitinib resistente que preguntamos si el tratamiento con SecinH3 podría hacer que las células sensibles a gefitinib y, por lo tanto, actuar sinérgicamente con esta EGFR-TKI. Por lo tanto, la proliferación de células H460 se determinó mediante un ensayo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) bromuro de tetrazolio -2,5-difenil (MTT) en presencia de 1 mM gefitinib y concentraciones crecientes de SecinH3 (Fig . 2A). Para cada combinación de la inhibición de esperar por la independencia de Bliss de los dos compuestos se calculó por el método de producto fraccional [21] y se compara con el grado observado de inhibición [22]. Para probar todas las combinaciones de tres, se encontró un efecto sinérgico de gefitinib y SecinH3. El ensayo MTT determina proliferación indirectamente mediante la medición de la actividad metabólica de la población celular. Para obtener una prueba adicional y más directo para la inhibición de la proliferación se realizó un ensayo de formación de colonias (Fig. 2B). También en este ensayo, la combinación de SecinH3 con gefitinib fue más eficiente que cada inhibidor solo.
A, H460 células fueron suero de hambre y se trató durante la noche con 0,5 M AG1024, 15 mM SecinH3 o su combinación. Después de la estimulación con IGF1 durante 5 minutos el estado de fosforilación de las proteínas indicadas se analizó por transferencia de western. Los gráficos resumen de 3 experimentos, las barras de error dan el error estándar. *, P & lt; 0,05, **, p & lt; 0,01, ***, p & lt; 0,001 en relación con las células tratadas con IGF1 con excepción de las comparaciones que son especificados por los soportes. B, la proliferación de las células H460 en presencia de los inhibidores indicados se determinó mediante el ensayo de MTT. Los números dan el valor relativo de la proliferación con células no tratadas establecidos como 1. La proliferación si se supone un efecto aditivo de SecinH3 y gefitinib (espera) se compara con el valor encontrado en los experimentos (observados). Los valores observados por debajo de los valores esperados indican sinergismo. ***, P & lt;. 0.001
inhibición de la señalización de EGFR en las células dependientes de EGFR se sabe que resulta en la detención del ciclo celular y para conducir a la inducción de la apoptosis. Como marcadores sustitutos para la detención del ciclo celular y la apoptosis, se determinó la expresión del ciclo celular p27Kip1 inhibidor de la progresión y la survivina inhibidor de la apoptosis (Fig. 3A). El tratamiento de las células con SecinH3 o gefitinib resultó en una disminución de la survivina (Fig. 3B) y un aumento de p27Kip1 (Fig. 3C), respectivamente. Este efecto fue más pronunciado en las células tratadas con los dos inhibidores.
Como expresión de ambas proteínas, p27Kip1 y survivina, está regulada por la señalización Akt la fosforilación de Akt se analizó en respuesta a la estimulación de EGF de las células (Fig. 4A). Considerando que la fosforilación inducida por EGF de EGFR y el sustrato de proteína adaptadora de insulina-receptor 1 (IRS1) se redujo drásticamente por gefitinib (Fig. 4B, C) la fosforilación de Akt no fue (Fig. 4D), indicando que la señalización de Akt era sin cambios en células H460 tratadas con gefitinib. Por el contrario, SecinH3 tuvo un efecto inhibitorio sobre la menos EGFR y la fosforilación de IRS1 pero mostró una inhibición sustancial de la activación de Akt. En consecuencia, la combinación de SecinH3 y gefitinib como resultado la inhibición casi completa de la fosforilación de las tres proteínas. Estos datos indican que el efecto antiproliferativo del tratamiento /gefitinib SecinH3 combinado es debido a la inhibición eficaz de la EGFR -. Eje de señalización Akt
ratones portadores de xenoinjertos de H460 subcutáneos fueron tratados con SecinH3 por inyecciones intraperitoneales diarias. A, se determinó el volumen del tumor cada día. El día 9 del experimento tuvo que ser suspendido debido a que el volumen de los tumores en los animales de control supera 1 cm
3. B, la distribución de los volúmenes tumorales en el día 9. C - D, el grado de apoptosis se analizó en secciones de tumores en día 9. C, se determinó el número de núcleos fragmentados por tinción de TUNEL. D, troceados, es decir, se activa, se detectó la caspasa-3 por imunohistochemistry. se muestran secciones representativas del tumor. 5 × y 40 × indican el aumento del objetivo. Para todos los gráficos, los medios y se muestran los errores estándar (n = 14). *, P & lt; 0,05, ** p & lt; 0,01, ***, p. & Lt; 0,001
SecinH3 Reduce Señalización y IGF1R dependiente proliferación
Además del EGFR, el factor de crecimiento-1 receptor similar a la insulina (IGF1R) es un importante regulador de la activación de Akt y la diafonía entre IGF1R y EGFR o miembros de la familia EGFR tales como Her2 se ha informado que un mecanismo de resistencia contra las drogas dirigidas a EGFR o HER2 en varios tipos de cáncer [16], [23], [24], [25], [26]. Como SecinH3 inhibe la señalización aguas abajo del receptor de insulina [15], [27] que comparte características clave con IGF1R señalización hemos probado si el tratamiento de células H460 con SecinH3 resultó en la activación reducida de la IGF1R - vía de señalización Akt (Fig. 5A). De acuerdo con los resultados obtenidos para el receptor de la insulina, la autofosforilación del IGF1R no se redujo tras el tratamiento SecinH3, pero aumentó. Sin embargo, la activación de Akt IRS1 y se redujo sustancialmente. La inhibición de la activación de Akt no se observó tras el tratamiento con gefitinib. El aumento de la fosforilación IGF1R tras el tratamiento con gefitinib y SecinH3 está de acuerdo con observaciones anteriores de que la inhibición de los resultados de EGFR en aumento de la activación de la IGF1R [16], [22], [25], [26]. A continuación pregunta si SecinH3 reduce la proliferación en presencia de IGF1 (Fig. 5B). De hecho, la proliferación se redujo tras el tratamiento SecinH3 y la reducción fue sinérgica con el inhibidor de IGF1R AG1024. La combinación de gefitinib y AG1024 también mostró un efecto antiproliferativo sinérgico aunque menos pronunciada que la combinación de SecinH3 y gefitinib.
SecinH3 retarda el crecimiento de xenoinjertos de H460 in vivo
Después de haber demostrado que reduce la proliferación SecinH3 de células de NSCLC de tipo salvaje EGFR in vitro nos preguntamos si el crecimiento tumoral se inhibió también in vivo. Por lo tanto, los ratones desnudos portadores de xenoinjertos subcutáneos H460 fueron tratados por inyecciones intraperitoneales diarias de SecinH3. El tratamiento con SecinH3 significativamente retardado el crecimiento del tumor (Fig. 6A). Cuando los ratones se sacrificaron después de 9 días de tratamiento significativamente se observaron tumores más pequeños en el grupo tratado con SecinH3 en comparación con el grupo tratado con solvente (Fig. 6B). En las secciones histológicas de los tumores de tinción TUNEL reveló un aumento de la tasa de apoptosis en los animales tratados (Fig. 6C), que también era evidente por la caspasa-3 tinción (Fig. 6D). En resumen, nuestros datos muestran que SecinH3 in vitro e in vivo reduce la proliferación de células de NSCLC que expresan EGFR de tipo salvaje.
Discusión
En este informe, se muestra que las células NSCLC presentan resistencia primaria contra el EGFR gefitinib-TKI responder al tratamiento con SecinH3, que inhibe el EGFR indirectamente por la orientación de sus activadores citoplasmáticos de la familia cytohesin. Este resultado puede aparecer inesperado porque la resistencia contra gefitinib puede interpretarse como la independencia de la señalización de EGFR. Este, de todos modos, no es el caso. El tratamiento con siRNAs-EGFR específica de diferentes líneas celulares de cáncer resistentes EGFR-TKI que expresan EGFR de tipo salvaje resultó en reducción de la proliferación de las células [9], [10], [11], [12] que indica que la resistencia a EGFR-TKI y EGFR la independencia no son siempre al menos equivalente. De acuerdo con ello, se ha demostrado que el EGFR contribuye a la supervivencia de las células de cáncer independientes de su actividad de quinasa [28]. Estos datos indican que el EGFR quinasa inhibida es todavía capaz de activar las vías que estimulan la proliferación o inhiben la muerte celular de señalización. En apoyo de esta hipótesis es la observación de que la inhibición de la EGFR por erlotinib induce la heterodimerización del EGFR con la IGF1R que activa el IGF1R y su señalización de quinasas aguas abajo incluyendo Akt [16]. Cytohesins han demostrado que interactúan directamente con el EGFR y de ese modo influir en su conformación [17]. Como una conformación particular del EGFR, el dímero asimétrico, es un requisito previo para la activación de quinasa [29], la modulación de EGFR conformación ha sido implicado en la activación del EGFR por cytohesins, un proceso que es inhibida por SecinH3. Como el tratamiento de las células H460 con SecinH3 resultó en un aumento de la fosforilación de la IGF1R una función similar de cytohesins durante la activación de la IGF1R por el EGFR pueden ser excluidas. Aparentemente, SecinH3 inhibe la señalización por el IGF1R EGFR activado aguas abajo del receptor. Este hallazgo está en total acuerdo con las observaciones anteriores de que SecinH3 no afectar a la activación del receptor de la insulina, pero inhibió la señalización aguas abajo del receptor a nivel del receptor de insulina adaptador de proteínas sustrato-1 resulta en reducción de la activación de Akt [15], [27], [ ,,,0],30]. Por lo tanto, la actividad anti-proliferativa de SecinH3 en células de NSCLC resistente EGFR-TKI puede explicarse por su efecto inhibidor dual en ambos, EGFR y IGF1R de señalización, lo que puede evitar que las células de eludir la inhibición del EGFR por el aumento de la señalización de IGF1R. Nos gustaría señalar que nuestros datos no excluyen la posibilidad de que el efecto antiproliferativo sinérgico de SecinH3 con gefitinib puede ser consecuencia de SecinH3 que afecta a la señalización de las RTK, además de la IGF1R. En particular, la amplificación del factor de crecimiento de hepatocitos receptor de c-MET [31] y la presencia de la proteína de fusión EML4-ALK [32] se han relacionado con la resistencia a EGFR-TKI. La activación de estas RTK por cytohesins ha, sin embargo, todavía no se ha investigado y por lo tanto actualmente no saber si la señalización de estas RTK podría verse afectada por SecinH3.
activación mejorada de la IGF1R ha sido reconocida como una de las principales causa de la resistencia contra las terapias dirigidas a EGFR en células de cáncer de origen diferente. inhibición acuerdo con ello, en los experimentos in vitro mostraron combinada de la actividad de EGFR IGF1R y para reducir la proliferación de células tumorales de forma sinérgica [16], [23], [24], [25], [26]. Por desgracia, estos resultados no se traducen en los ensayos clínicos, donde, hasta ahora, la aplicación de terapias de combinación de EGFR y la orientación de IGF1R terapias no han demostrado mejoras significativas respecto a la terapia sola [33], [34]. Las razones de estos resultados decepcionantes Actualmente no se conocen, pero pueden estar en la comprensión incompleta de los detalles moleculares de la diafonía entre EGFR y la señalización de IGF1R que impide la selección racional de los pacientes que pueden beneficiarse de la terapia de combinación. Las mutaciones que predicen la respuesta a la terapia específica, de conformidad para el EGFR, no se han reportado para el IGF1R [35] y pueden, por lo tanto, no puede utilizarse para seleccionar a los pacientes. En un estudio clínico en busca de biomarcadores que predicen beneficios de EGFR combinado /IGF1R inhibición KRAS mutado fue identificado [36]. Los estudios in vitro mostraron, sin embargo, datos conflictivos sobre el efecto antiproliferativo de la inhibición combinada de la EGFR y la IGF1R en KRAS mutado células H460. Mientras que un estudio no encontró sinergismo [25] Otro estudio [16]. En nuestro estudio se observó un sinergismo débil de gefitinib y AG1024 mientras que no se encontró sinergia más fuerte para las combinaciones de cualquiera de estos compuestos con SecinH3. Estas discrepancias ponen de relieve la idea de que la inhibición de objetivos idénticos por diferentes inhibidores o estrategias de inhibición puede conducir a diferentes resultados biológicos. Por lo tanto, los enfoques que no se basan en la inhibición directa de las actividades de EGFR y IGF1R quinasa pero se dirigen a estos receptores indirectamente a través de sus activadores o el adaptador de moléculas pueden proporcionar comprensión más completa de estas vías de señalización y por lo tanto proporcionar objetivos todavía no reconocidas para nuevos enfoques terapéuticos.
Reconocimientos
agradecemos Y. Aschenbach-Paul, A. Florin y U. Rommerscheidt-alboroto de asistencia técnica.