Extracto
Antecedentes
hepatoma hasta reguladas proteína (HURP) es un componente de la vía de la cromatina dependiente de montaje del husillo. Examinamos el valor predictivo pronóstico de HURP en el carcinoma hepatocelular humano (HCC).
Métodos
HURP expresión se evaluó mediante inmunocitoquímica de las células de hepatoma de aspiración con aguja fina en 97 pacientes con HCC con el Barcelona Clinic Liver Cancer (BCLC) etapa A. Posteriormente, estos pacientes fueron sometidos a hepatectomía parcial (n = 18) o ablación por radiofrecuencia (n = 79) y fueron seguidos durante 2 a 35 meses. Los parámetros clínico se sometieron a análisis de supervivencia.
Resultados
HURP expresión en células de HCC aspirados se detectó en el 19,6% de los pacientes. El análisis de supervivencia de Kaplan-Meier mostró que la expresión HURP positivo (
P = 0,023
), clasificación citológica ≥3 (
P
= 0,008), AFP ≥35 ng /ml (
P
= 0,039), la bilirrubina ≥1.3 mg /dl (
P
= 0,010), AST ≥50 U /L (
P
= 0,003) y ALT ≥35 U /L (
P
= 0,005) se asociaron con una supervivencia libre de enfermedad. Una de riesgos proporcionales de Cox multivariado modelo escalonado reveló que la expresión HURP positivo (HR, 2,334; IC del 95%, 1,165-4,679,
P = 0,017
), AST ≥50 U /L (HR, 3,697; IC del 95% , 1,868 a 7,319,
p Hotel & lt; 0,001), grado citológico ≥3 (HR, 4.249; IC del 95%, 2,061-8,759,
P Hotel & lt; 0,001) y el número de tumores & gt; 1 (HR, 2,633; IC del 95%, 1,212-5,722,
P = 0,014
) fueron predictores independientes de la supervivencia libre de enfermedad. Mediante la combinación de los 4 predictores independientes, los pacientes con diferentes escalas de riesgo (RS) mostraron supervivencia libre de enfermedad (distinguibles RS≤1 vs. RS = 2,
P = 0,001;
RS = 2 vs. RS = 3, P & lt; 0,001). Por el contrario, los pacientes que no se pueden separar en subgrupos de pronóstico distinguibles mediante el uso de un sistema de estadificación AJCC /UICC TNM.
Conclusión
HCC pacientes con estadio BCLC A pueden ser separados en tres grupos de pronóstico-distinguibles por uso de una puntuación de riesgo que se basa en la expresión en células aspiradas HURP HCC, ALT grado citológico y el número de tumores
Visto:. Chang ML, Lin SM, Yeh CT (2011) HURP asistida expresión-Identificar las escalas de riesgo Subgrupos pronóstico diferenciables en el cáncer de hígado en estadio temprano. PLoS ONE 6 (10): e26323. doi: 10.1371 /journal.pone.0026323
Editor: Bernard W. Futscher, La Universidad de Arizona, Estados Unidos de América
Recibido: 22 Julio, 2011; Aceptado: September 23, 2011; Publicado: 17 de octubre 2011
Derechos de Autor © 2011 Chang et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este proyecto recibió el apoyo de subvención del Programa de Chang Gung de Investigación médica (CMRP-370693). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
el uso de un enfoque de la bioinformática para analizar integradores etiquetas de secuencias expresadas en el hígado humano, un nuevo gen regulado del ciclo celular hepatoma llamado hasta reguladas proteína (HURP) se identificó hace 10 años [1]. HURP, expresa abundantemente en el carcinoma humano hepatocelular (HCC, es decir. Hepatoma), es un sustrato fosfoproteína mitótico para Aurora-A [2]. Aurora-A es una serina /treonina quinasa regulada por el ciclo celular que muestra los niveles pico de expresión durante la fase G2 /M [3], [4]. El hecho de que los niveles de HURP fluctúan durante el ciclo celular y alcanzan un pico en G2 /M sugiere que juega un papel en la regulación del ciclo celular [5]. Otros estudios han indicado que HURP es un componente de la vía de la cromatina dependiente para el montaje del husillo. Tiene un papel crucial en el ensamblaje de los microtúbulos inducida por la cromatina, se estabiliza y se lía K-fibras, y es esencial para la producción de novo de los microtúbulos de los cromosomas [6]. Además, su actividad es necesaria para la captura adecuada cinetocoro, congression cromosoma eficiente, y la progresión mitótico oportuna. Los defectos en estos procesos pueden desencadenar la iniciación anafase inadecuado y la inestabilidad genómica [7], [8]. Aparte de la regulación transcripcional, la abundancia intracelular de HURP también está regulada por Cdk1 /ciclina B a nivel postraduccional [9], [10]. Sin embargo, puede haber algunas vías redundantes de compensación para la función de HURP en el ciclo celular como HURP (- /-) ratones desarrollan normalmente y son indistinguibles de sus compañeros de camada de tipo salvaje. El único fenotipo documentado para HURP (- /-) ratones es que los ratones hembra son incapaces de formar sitios de implantación debido a la incapacidad de someterse a la reacción decidual [11]
A pesar de los datos experimentales que indica un enlace entre la célula. desregulación del ciclo y la aberración HURP, hay pruebas convincentes se ha establecido hasta la fecha sugiere un papel oncogénico directo del HURP en el CHC. Sin embargo, se informó de forma esporádica piezas de evidencia que implica un potencial oncogénico de HURP. HURP expresión positiva se asoció con la aparición y la recurrencia del carcinoma de células de transición [12], [13]; análisis de expresión génica reveló que HURP representado un marcador pronóstico capaz de distinguir entre tumores benignos y malignos adrenocorticales [14], [15]; y en las líneas celulares 293T (American Type Culture Collection (ATCC) Manassas, VA, EE.UU.), la sobreexpresión de HURP en células diferenciadas aumentó el crecimiento celular y bloquea la apoptosis que normalmente es inducida por la privación de suero [16]. Por otra parte, el gen HURP es capaz de aumentar la quimiosensibilidad de los análogos de desoxicitosina en células NIH3T3 [17], y la proteína viral HBx activa la expresión de HURP para prevenir la apoptosis durante la progresión del cáncer y el establecimiento de la quimiorresistencia en células Hep 3B [18] .
CHC representa el 90% de los tumores hepáticos primarios, representa el quinto cáncer más común en el mundo, y es la tercera causa principal de muerte relacionada con el cáncer en todo el mundo [19], [20]. Una puesta en escena precisa de la enfermedad puede ayudar a los médicos a comprender el pronóstico y hacer la elección correcta de las modalidades terapéuticas para beneficiar a los pacientes. Actualmente, hay varios sistemas de puntuación de pronóstico que se han establecido usando diferentes variables clinicopatológicas [21]. Sin embargo, incluso entre los pacientes en la misma etapa de HCC y clasifica por el mismo sistema de puntuación, el pronóstico post-terapéutica sigue siendo diversa. Esto es más probable debido al hecho de que HCC es una enfermedad multi-etiológico con mecanismos patogénicos subyacentes complejos causados por una variedad de factores de riesgo. Presumiblemente, la inclusión de marcadores moleculares buenos en un sistema de predicción de pronóstico puede remediar estas insuficiencias y mejorar los métodos de estadificación actuales [22]. Debido a la disponibilidad de examen de ultrasonido, así como otros métodos de imagen sofisticados, se detectan un número creciente de los HCC en una etapa temprana. Además, para minimizar la invasividad de los procedimientos, el diagnóstico patológico es reemplazado gradualmente por citología por aspiración con aguja fina. Además, la resección quirúrgica está siendo reemplazado en gran medida por la ablación por radiofrecuencia (RFA), debido a la eficacia terapéutica comparable entre los dos tratamientos. características citológicas de las células de HCC, incluyendo la diferenciación y clasificación de la inmunotinción de antígenos específicos, se obtienen fácilmente a partir de aspiración con aguja fina. Estos parámetros actualmente no están incluidos en cualquiera de los sistemas de puntuación, pero pueden proporcionar información importante para la predicción del pronóstico eficaz. Aunque HURP fue minado por primera vez de la base de datos de HCC humano genes regulados, su papel en humanos HCC
in vivo
ha sido difícil de alcanzar. Para hacer frente a esto, hemos establecido un método de tinción inmunohistoquímica para detectar la expresión en células de HCC HURP aspirados de pacientes. Las características clínico, clasificación citológica y la expresión en células de HCC HURP fueron tomadas en cuenta para el cálculo de los predictores de pronóstico en estos pacientes con HCC.
Materiales y Métodos
Los pacientes
Este era un solo centro, estudio prospectivo de pronóstico que se llevó a cabo después de la aprobación por la Junta de Revisión Institucional de Chang Gung Medical Center. escrito el consentimiento informado se obtuvo de todos los participantes antes de la inclusión. Desde noviembre de 2007 hasta diciembre de 2009, 97 pacientes consecutivos (62 varones y 35 mujeres), que fueron diagnosticados con HCC tienen por citología por aspiración y por lo menos dos estudios de imágenes dinámicas (tomografía computarizada dinámica y angiografía), se incluyeron en el estudio. Estos pacientes ya sea cumplido los criterios para el tratamiento RFA [23] o tenían HCC localizadas y eran adecuados para la extirpación quirúrgica de los tumores. bioquímicas de sangre para los siguientes parámetros se analizaron: aminotransaminasa de aspartato (AST, & lt; 34 U /L), aminotransaminasa alanina (ALT, & lt; 36 U /L), bilirrubina total (Bil, & lt; 1,3 mg /dL), alfa- fetoproteína (AFP, & lt; 15 ng /ml), albúmina (3.5 a 5.5 g /dL), el tiempo de protrombina (10-13 segundos), la creatinina (F: 0,44 a 1,03, H: 0,64 a 1,27 mg /dL). antígenos de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg) se ensayaron mediante un kit de radioinmunoensayo comercialmente disponible (Ausria-II, HBsAg-RIA; Abbott Laboratories, North Chicago, IL). Los anticuerpos contra el virus de la hepatitis C (HCV Ab) se analizaron utilizando un inmunoensayo enzimático de tercera generación (Ax SYM VHC III, Abbott Laboratories, North Chicago, IL)
Además, los siguientes datos clínico-patológicos también se registraron:. Género , edad, presencia de cirrosis hepática, uso de alcohol, grado citológico de Edmondson, el número de tumores, el mayor tamaño del tumor, la presencia de ascitis en la terapia, la fecha de la terapia (RFA o cirugía), la fecha de la recurrencia del tumor, y la fecha del último seguimiento o relacionados con HCC muerte. En nuestro centro médico, los pacientes con trombosis de la vena porta principal fueron excluidos de la terapia quirúrgica o ablación.
aspiración del hígado para diagnosticar HCC
Bajo control ecográfico, una de 21 o calibre 22 transhepática percutánea colangiografía la aguja se utiliza para la citología por aspiración. Los frotis secados al aire se tiñeron inmediatamente con el método de Bahía de [24]. La clasificación de HCC fue hecha por Edmondson y de Steiner de clasificación [25]. Si la muestra fue insuficiente o difícil para el diagnóstico citológico, se realizó una biopsia hepática inmediata para el examen patológico [26].
HURP inmunocitoquímica
Los anticuerpos de ratón anti-HURP fueron amablemente proporcionados por el Prof. Chou CK (Universidad de Yang-Ming, Taiwán). La especificidad y la sensibilidad de estos anticuerpos se han caracterizado en las publicaciones anteriores [1], [11], [16], [27]. HCC tejidos HURP-positivos y negativos (de acuerdo con el análisis de transferencia Western) se utilizaron como controles para cada lote de tinción. macrófagos normales, linfocitos y granulocitos en los frotis de células se utilizaron como controles negativos internos. aspirado células HCC fueron fijadas en metanol puro. expresión de hepatocitos de HURP se evaluó por el método de inmunoperoxidasa avidina-biotina. Los portaobjetos se incubaron en tampón fosfato salino (PBS) que contiene peróxido de hidrógeno al 3% durante 20 minutos y posteriormente se lavaron dos veces (5 minutos cada uno) en PBS que contenía 0,025% de Triton X-100 (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) . Los portaobjetos se incubaron después con suero normal de caballo 10% durante 30 minutos, seguido de una incubación con una dilución 1:500 del anticuerpo anti-ratón HURP a 37 ° C durante 1 hora. Después de ser lavado con solución salina tamponada con fosfato (PBS; 0,1 M, pH 7,4), las secciones se incubaron posteriormente con inmunoglobulinas de caballo anti-ratón conjugados con biotina (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, PA.) A una dilución 1:400 para 40 minutos. Después de ser enjuagados con PBS, las secciones fueron tratadas con complejo (Kit Vectastain Elite ABC, Vector Labs, CA) avidina-biotina durante 30 minutos y después se incubaron en una solución de diaminobenzidina (DAB, Vector Labs, CA) durante 1 minuto. contratinción nuclear se realizó con hematoxilina.
Tumor Ablación
Los pacientes fueron tratados con el sistema de ablación por RF internamente enfriada (Valleylab ™, Boulder, Colorado, EE.UU.). Todos los procedimientos de ablación RF fueron realizadas por tres gastroenterólogos con amplia experiencia en técnicas de ablación. Los detalles de la ablación del tumor fueron descritas anteriormente [28].
La extirpación quirúrgica del tumor
fueron resecadas completamente, con un margen de seguridad de más de 1 cm.
Sigue -up estudios
para los pacientes que recibieron ARF, tomografía computarizada o resonancia magnética se realizó 3 semanas después para determinar si la ablación fue completa [28], [29]. Tras la ablación completa o resección quirúrgica, el seguimiento se realizó mediante ecografía, radiografía de tórax, AFP, y la bioquímica en sangre cada 1 a 3 meses durante el primer año y cada 3 a 6 meses a partir de entonces. Los hallazgos anormales se verificaron mediante tomografía computarizada o resonancia magnética. recurrencia intrahepática se estableció mediante el uso de los criterios descritos en otra parte [30]. Dependiendo de la localización de las lesiones, así como la condición del paciente, la recurrencia extrahepática fue confirmado por biopsia, citología por aspiración, tomografía computarizada o resonancia magnética de imagen [30].
Estadísticas
Enfermedad la supervivencia exento se midió a partir de la fecha de diagnóstico de la fecha de recurrencia, metástasis, la muerte o el último seguimiento. El método de Kaplan-Meier se utilizó para estimar la probabilidad de supervivencia, y se utilizó la prueba de log-rank para comparar las curvas de supervivencia entre los grupos. Para determinar los puntos de corte de un factor con datos paramétricos, se realizó un análisis univariado experimental para evaluar la asociación entre el factor y la supervivencia libre de enfermedad utilizando una serie de valores como el aumento de los puntos de corte. Este método fue utilizado con éxito para identificar factores pronósticos clínicos y virológicos en pacientes con HCC [30]. Los puntos de corte experimentales se calcularon utilizando la fórmula siguiente: el valor más pequeño + n /15 × (el valor más grande - el valor más pequeño) (n = 1 a 14). Como tal, una serie de valores de corte se generaron para cada factor paramétrico. Los grupos experimentales fueron dicotómicas por lo tanto separadas por un punto de corte al menos 1/15 o como máximo 14/15 de la gama de factor. Esta forma de agrupación era más fácilmente a ser utilizado para hacer recomendaciones de tratamiento en el futuro. A continuación, se selecciona el punto de corte que lleva al menor valor P para el posterior análisis de riesgos proporcionales de Cox. La justificación, así como la limitación de este enfoque mínima P-valor en los estudios clínicos también han sido discutidos en una revisión [31]. modelos de riesgos proporcionales de Cox por etapas fueron utilizados para predecir predictores independientes asociados con la supervivencia libre de enfermedad. Los resultados se expresaron como cocientes de las tasas de riesgo (CR) con intervalos de confianza del 95% (IC). En este estudio, la corrección de Bonferroni para múltiples comparación no se aplicó a causa de dos razones. En primer lugar, muchos de los factores incluidos eran conocidos factores pronósticos, pero no seleccionados al azar factores desconocidos. Nuestro propósito era entender lo importante que era la expresión HUPR en comparación con estos factores conocidos. En segundo lugar, nuestro objetivo final es establecer un sistema de combinación de puntuación. Por lo tanto, los factores de candidatos que se necesitaban posiblemente significativos que deben incluirse.
El análisis estadístico se realizó con el programa SPSS (versión 18.0).
Resultados
Los parámetros clínicos
las características basales de los 97 pacientes se enumeran en la tabla 1. Todos ellos pertenecían a la Clínica de Barcelona cáncer de hígado (BCLC) etapa A. VHB y VHC representó la mayor parte de nuestros casos. Casi el 90% de los pacientes eran cirróticos. La mayoría de los pacientes tenían la función hepática anormal con los niveles de AST y ALT medias superiores a los límites normales. Sin embargo, sólo una minoría de los pacientes tuvieron complicaciones graves (por ejemplo, ascitis: 11,3%), mientras que los niveles medios de la albúmina, bilirrubina y tiempo de protrombina estaban dentro de los límites normales. 75,3% de los pacientes tenían CHC solitario y sólo el 5,2% de los pacientes tenían invasión microvascular. El tamaño del tumor varió de 1,3 a 5,0 cm de diámetro. 81,4% de los pacientes recibieron ARF, mientras que el resto de pacientes con tumores extirpados quirúrgicamente. Según el 6
ª edición de la Clasificación TNM del AJCC /UICC, había 69 pacientes y 28 pertenecen a la Etapa I y Etapa II, respectivamente.
Expresión de HURP en los HCC
Entre los 97 pacientes incluidos, la expresión positiva de HURP se encuentra en las células de HCC aspirados de 19 pacientes (19,6%). Ocho casos representativos en los que las células aspiradas teñidas positivamente con anti-HURP se muestran en la figura 1. expresión HURP se detectó en más del 80% de las células aspiradas en 15 pacientes y la expresión se localizaba en el citoplasma de las células HCC (figura 1, panel inferior). Sin embargo, en los 4 restantes, & lt; 50% de las células de HCC se tiñeron positivamente (figura 1, panel superior). En 2 de estos 4 pacientes, se encontró que sólo unas pocas células positivas HCC HURP dispersa.
HURP estaba manchada en color marrón.
Para entender si la expresión HURP se asoció con cualquiera de los parámetros clínico, se realizó un análisis de regresión logística. Se encontró que la expresión HURP no se asoció significativamente con ningún parámetro clínico-patológica (P & gt; 0,05 para todos los factores clínico-patológicos).
Asociación entre los parámetros clínicos y la supervivencia libre de enfermedad
La asociación entre los parámetros clínicos y la supervivencia libre de enfermedad se muestra en la tabla 2. Entre los parámetros, la expresión HURP positivo, clasificación citológica ≥3, AFP ≥35 ng /ml, bilirrubina ≥1.3 mg /dl, AST ≥50 U /L y ALT U ≥35 /L se encontró que se asocia con una supervivencia libre de enfermedad (Figura 2).
n, el número de pacientes con CHC en riesgo.
Los predictores independientes de la enfermedad la supervivencia exento en el multivariante por pasos de Cox de riesgos proporcionales modelo
Uso de la Cox modelo de riesgo proporcional multivariado escalonado, 4 factores se mantuvo como predictores independientes de la supervivencia libre de enfermedad: la expresión HURP positivo en células de HCC, AST ≥50 U /L, ≥3 citológico grado, y el número de tumores & gt; 1. Su independencia también fue verificada por pruebas de correlación de dos variables. Vale la pena señalar que después de ajustar por otros factores de confusión, el número tumor (que no es un parámetro importante para la supervivencia libre de enfermedad en el análisis univariado) se convirtió en un factor significativo en el modelo de riesgo proporcional de Cox. La razón de riesgo (HR), 95% intervalo de confianza (IC), y los valores de P de los 4 predictores independientes se enumeran en la tabla 3. Por último, se asignó una puntuación de riesgo a cada uno de los pacientes mediante el cálculo del número de predictores independientes realizados por cada paciente. Las puntuaciones de riesgo variaron de 0 a 3, con ningún paciente lleva los 4 factores (figura 3). Debido a que no se encontró ninguna diferencia significativa en las supervivencias libres de enfermedad entre los pacientes con puntuación de riesgo = 0 y aquellos con riesgo de puntuación = 1 (Figura 3A,
p = 0,421
), se fusionaron estos dos grupos (Figura 3B) . La supervivencia libre de enfermedad fueron significativamente diferentes entre los pacientes con puntuaciones de riesgo ≤ 1, los pacientes con una puntuación de riesgo = 2, y los pacientes con una puntuación de riesgo = 3 (Figura 3B). En contraste, no hubo diferencia (
p = 0,91
) se observó entre las supervivencias libre de recidiva de la etapa I 69 TNM y 28 pacientes en estadio II.
(A) Comparación de la disease- supervivencias libres entre pacientes con diversas escalas de riesgo variaron de 0 a 3. (B) Los pacientes con puntuación de riesgo = 0 y los que tienen puntuación de riesgo = 1 se fusionaron.
Discusión
en general, la resección hepática fue superior a la RFA en los HCC elegibles para la extirpación quirúrgica, particularmente para tumores & gt; 3 cm [32]. Cuando el tratamiento de pacientes con HCC solitarios ≤3 cm, RFA tiene una comparable recurrencia supervivencia libre de la resección quirúrgica mientras que es menos invasiva [33]. Sin embargo, la resección hepática sigue siendo el tratamiento de elección para los pacientes no cirróticos CHC en a causa de la función hepática bien preservada en el hígado residual. Por otro lado, RFA es seguro y eficaz en la gestión de pacientes con HCC con cirrosis hepática, y su alta capacidad de repetición hace particularmente valiosa en el control de recidivas intrahepáticas [34]. En dos ensayos controlados aleatorios prospectivos que compararon la RFA con la resección quirúrgica, no se encontró ninguna diferencia significativa en la supervivencia global o la supervivencia libre de recidiva. Además, las tasas de complicaciones fueron menores de esperar en los pacientes tratados con RFA [35], [36]. Por lo tanto, la elección de la terapia en HCC etapa muy temprana debería depender de la idoneidad del paciente para la cirugía, el estado general, la gravedad de la cirrosis hepática, y la viabilidad de RFA les da la localización del tumor [37]. En nuestra serie, los pacientes no aptos para la hepatectomía se sometieron a la RFA. De acuerdo con informes anteriores, la supervivencia libre de enfermedad entre estos dos métodos no fue significativamente diferente (tabla 2). Por lo tanto, el sesgo de los diferentes métodos de tratamiento debería ser insignificante.
La naturaleza heterogénea de HCC ha dificultado en gran medida la búsqueda de predictores pronósticos moleculares eficaces. En un estudio de casos y controles de los casos de hepatitis C 39 relacionadas con el virus de HCC (24) en etapa temprana y 77 controles emparejados, ni de protrombina des-gamma-carboxi ni AFP fue capaz de predecir de manera óptima la aparición de HCC [38]. Por lo tanto, incluso para el CHC que tiene una enfermedad subyacente homogénea, un biomarcador fiable aún no se ha encontrado. Según el 6
ª edición de la AJCC TNM Clasificación /UICC, 69 y 28 pacientes en estadio BCLC A del presente estudio fueron clasificados como estadio I y II, respectivamente. Sin embargo, los pacientes que no se pueden separar en subgrupos de pronóstico distinguibles mediante el uso de un sistema de estadificación AJCC /UICC TNM. En el presente estudio, hemos demostrado la predicción independiente de supervivencia libre de enfermedad en el CHC por la expresión en células de HCC HURP aspirados. HURP se considera un marcador de células madre y es indetectable en células completamente diferenciadas [39]. Similar a esta observación, otro marcador de células madre, epiteliales molécula de adhesión celular (EpCAM), se encontró que se expresa predominantemente en el tipo de HCC y de expresión EpCAM niveles confluente multinodulares predijo la recurrencia de HCC [40]. Además, la sobreexpresión de Aurora B, una proteína de pasajeros cromosómica involucrada en la segregación cromosómica, husillo puesto de control, y la citocinesis [41], predijo de forma independiente la invasión tumoral y mal pronóstico de HCC [42]. La similitud funcional entre HURP y Aurora B apoya aún más el papel predictivo de HURP en la supervivencia libre de enfermedad de HCC.
En los últimos años, la siembra de células del tumor a lo largo del trayecto de la aguja se ha encontrado que es un riesgo asociado con el hígado biopsia [43]. Fine citología por aspiración con aguja ha demostrado ser una alternativa segura y exacta de la biopsia hepática para identificar la gran mayoría de los HCC [44]. Por lo tanto, HURP tinción en células de HCC aspirados potencialmente puede convertirse en un método conveniente para la predicción de la supervivencia libre de enfermedad de HCC. Sin embargo, hay algunas limitaciones asociadas con esta técnica. Mientras HURP lleva el nombre de su gen es hasta reguladas en HCC humano, solamente el 19,5% (19/97) de nuestra HCC aspirado muestras mostraron una expresión HURP positivo. Es posible que en el resto de muestras, los niveles de expresión de HURP eran demasiado bajos para la detección inmunohistoquímica. Es probable que en estas muestras, la mayoría de las células no proliferantes HCC se encontraban en estados fuera del ciclo. Esto hizo que los tumores crecen lentamente, lo que resultó en una supervivencia libre de enfermedad. Por otra parte, en vista de la suposición de que HURP podría ser un marcador de células madre, la baja prevalencia de células HURP-positivos en este estudio podría reflejar el hecho de que la mayoría de nuestros HCC surgió de la mutación relacionada con la inflamación inducida por los insultos virales a los hepatocitos (VHB o la infección por VHC en nuestra serie fue de más del 90%), mientras que los HCC que se desarrollan a partir de
de novo
la mutación de las células madre hepáticas ingenuos sólo suponen una minoría de los casos. En este estudio, hemos demostrado que la alta AST, ALT, bilirrubina y los niveles se correlacionan con una supervivencia libre de enfermedad. Esto sugiere que necroinflamación hepática relacionada con el virus desempeña un papel importante en HCC recurrencia. En este momento, no está claro si hay una vía para que las células de HCC que se desarrollan a partir relacionada con el virus daño de hepatocitos a evolucionar en HCC con la firma de las células madre de cáncer. Finalmente, como se mencionó en la introducción, se han propuesto vías redundantes que pueden compensar para la función HURP. Como tal, para los HCC que carecen de expresión HURP, las vías oncogénicas alternativas no relacionadas con HURP sobre-expresión son muy plausible.
Otro aspecto desconcertante de la presente datos es que casi toda expresión HURP localiza en el citoplasma de las células de HCC . Importin-α1 ha demostrado ser un predictor independiente de recurrencia precoz tras la resección HCC [45]. HURP es uno de los factores conjunto de husillo cuya actividad está regulada por importins, y la distribución en estado estacionario de HURP se determina por la shuttling continua de HURP entre el citoplasma y el núcleo a través de importin [46]. La mayoría de los estudios se han centrado en HURP su papel conjunto del eje en el núcleo durante la mitosis, mientras que poco se sabe acerca de su función en el citoplasma durante la interfase. Tanto HURP y Importin-α1 son sobre-expresado en los HCC con mal pronóstico, lo que sugiere un papel importante para estas moléculas en la oncogénesis. El citoplasmática aberrante sobreexpresión de HURP en el CHC podría implicar una función inexplorado en la regulación del ciclo celular que exige una mayor clarificación.
Además de HURP positividad, AST ≥50 U /L, grado citológico ≥3, y el número de tumores & gt; 1 también resultaron ser predictores independientes de la supervivencia libre de enfermedad en los pacientes con HCC. clasificación citológica representa la diferenciación de las células de HCC y el número tumor puede indicar un origen tumor uni o multi-focal o alternativamente, la puesta en escena de HCC. Estos factores son todos indicativos de mal pronóstico y se han documentado en varios estudios [47], [48]. AST, ALT, bilirrubina y los niveles de AFP, que fueron identificados como importantes predictores de pronóstico en el análisis univariado, reflejan bien el grado de inflamación (AST, ALT y bilirrubina) o la carga tumoral (AFP). AFP también refleja el grado de inflamación hepática en algunos casos [49]. En la literatura, varias líneas de evidencia indican que la inflamación hepática es un predictor pronóstico para el CHC. El nivel de PCR preoperatoria se demostró que se asocia con la agresividad de HCC recurrente temprana en un estudio de 124 pacientes que se sometieron a hepatectomía [50]. Además, los estudios en relación con HCC relacionada con el VHC han demostrado que el CHC casi siempre se desarrolla en un anormal del hígado histológicamente y que la mera existencia de una enfermedad hepática crónica representa un riesgo potencial para el desarrollo de HCC [51]. De hecho, necroinflamación hepática crónica con su posterior generación de especies reactivas de oxígeno puede inducir mutaciones cromosómicas y transformación eventual maligna de hepatocitos en proliferación. Del mismo modo, la mala reserva de función hepática, sugerida por hiperbilirrubinemia, se observó una relación significativa con HCC ocurrencia en otros estudios [52]. Un estudio que incluyó a 150 pacientes con un único HCC menor de 5 cm de diámetro tratados con radioterapia de partículas encontró que la clasificación de Child-Pugh fue un factor de riesgo independiente para la recidiva local [53]. Por último, en un estudio retrospectivo compuesta de 413 pacientes cirróticos CHC reciben RFA y 648 pacientes con CHC cirróticos que recibían la resección quirúrgica, la AFP sérica se encontró que era el único factor predictivo significativo para todos los análisis de supervivencia [54]. Peinando las 4 predictores independientes, que habían sido asociados directa o indirectamente con el pronóstico de HCC en la literatura, las puntuaciones de riesgo de los pacientes con CHC separan los pacientes en tres grupos distintos con diferentes pronósticos significativamente después de la terapia. Por lo tanto, en pacientes con estadio BLCL A, las puntuaciones de riesgo que incorporan tinción HURP son capaces de proporcionar más distinciones entre los diferentes grupos de pronóstico post-terapéuticos. El tamaño pequeño de la muestra del presente estudio, sin embargo, limita su valor clínico. Para validar la importancia pronóstica de la expresión HURP en una cohorte más amplia HCC, un estudio multicéntrico sería extremadamente informativo y debe llevarse a cabo en el futuro.
Para nuestro conocimiento, este es el primer estudio en cuanto a la aplicación clínica HURP de expresión en la predicción de la supervivencia libre de enfermedad de los pacientes con HCC. Una nueva puntuación de riesgo, compuesto de 4 predictores independientes, incluyendo HURP positividad en las células de HCC, AST ≥50 U /L, grado citológico ≥3, y el número de tumores & gt; 1, separa los pacientes con CHC en estadio BCLC A en tres grupos de pronóstico-distinguibles. Estos hallazgos pueden ser útiles para evaluar los efectos de las intervenciones terapéuticas para los pacientes con CHC en estadio BCLC A, que es el escenario más común descubierto debido a la detección precoz de HCC tumor a través de encuesta ordenada. Por último, la terapia personalizada y el seguimiento de los pacientes con HCC etapa temprana pueden llevarse a cabo en un futuro próximo.