Extracto
Introducción
En este estudio, 27 polimorfismos genéticos que se informó anteriormente a estar asociado con resultados clínicos en pacientes con cáncer colorrectal fueron investigados en relación con la supervivencia global (SG) y la supervivencia libre de enfermedad (DFS) en pacientes con cáncer colorrectal a partir de Terranova.
Métodos
las cohortes de descubrimiento y validación de compuestos de 532 y 252 pacientes, respectivamente. 27 genotipos de los polimorfismos se obtuvieron por primera vez en la cohorte de descubrimiento y análisis de supervivencia se realizaron suponiendo que el modelo genético co-dominante. Polimorfismos asociados a la evolución de la enfermedad en la cohorte de descubrimiento fueron luego investigadas en la cohorte de validación.
Resultados
Al ajustarse según el sexo, la edad, el estadio del tumor y el estado de inestabilidad de microsatélites (MSI), cuatro eran polimorfismos predictores independientes de sistema operativo en la cohorte de descubrimiento
MTHFR
Glu429Ala (HR: 1,72 IC del 95%: 1,04 a 2,84; p = 0,036),
ERCC5
His46His (HR: 1,78; IC del 95% : 1,15 a 2,76; p = 0,01),
SERPINE1 -
675indelG (HR: 0,52 IC del 95%: desde 0,32 hasta 0,84, p = 0,008), y la eliminación homocigótica del
GSTM1
gen (HR: 1,4; IC del 95%: 1,03 a 1,92; p = 0,033). En la cohorte de validación, la
MTHFR polimorfismo
Glu429Ala se asoció con OS más corto (HR: CI 1,71, 95%: 1,18 a 2,49, p = 0,005), aunque con un genotipo diferente de la cohorte de descubrimiento (genotipo CC en la cohorte de descubrimiento y el genotipo de CA en la cohorte de validación). Cuando estratificado basado en el tratamiento con 5-fluorouracilo (5-FU) regímenes basados, este polimorfismo se asoció con OS reducida sólo en pacientes no tratados con 5-FU. En el análisis de DFS, cuando se ajusta por otras variables, el genotipo TT de la
ERCC5
His46His polimorfismo se asoció con menor DFS en ambas cohortes (descubrimiento de cohortes: HR: 1,54; IC del 95%: 1.4 a 2.29, p = 0,032 y la replicación de cohortes: HR: 1,81; IC del 95%: 1,11 a 2,94; p = 0,018)
Conclusiones
En este estudio, las asociaciones del
MTHFR
. polimorfismo Glu429Ala con el sistema operativo y el
ERCC5
His46His polimorfismo con DFS fueron identificados en dos cohortes de pacientes con cáncer colorrectal. Nuestros resultados también sugieren que el
MTHFR
Glu429Ala polimorfismo puede ser un marcador pronóstico adverso en pacientes no tratados con 5-FU
Visto:. Negandhi AA, Hyde A, E Dicks, Pollett W, Younghusband BH, Parfrey P, et al. (2013)
MTHFR
Glu429Ala y
ERCC5
His46His polimorfismos están asociados con el pronóstico en pacientes con cáncer colorrectal: análisis de dos cohortes independientes de Terranova. PLoS ONE 8 (4): e61469. doi: 10.1371 /journal.pone.0061469
Editor: Xiao-Ping Miao, MOE clave Laboratorio de Medio Ambiente y Salud, Escuela de Salud Pública, Tongji Medical College, Universidad Huazhong de Ciencia y Tecnología, China
Recibido: October 25, 2012; Aceptado: March 8, 2013; Publicado: 23 Abril 2013
Derechos de Autor © 2013 Negandhi et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio es financiado por subvenciones de la Memorial University; el Premio Cox 2010 por la Facultad de Medicina de la Universidad Memorial; el Instituto Canadiense de Investigación en Salud (CIHR) Fondo para el equipo de investigación de la salud del cáncer colorrectal Interdisciplinaria de la Universidad de Toronto y la Memorial University, el Instituto Nacional del Cáncer de Canadá (otorga 18223 y 18226) y el Fondo de Innovación del Atlántico para el Equipo de Investigación Interdisciplinaria en Human Genetics. AAN fue apoyada por el CIHR Investigación Interdisciplinaria de la Salud Equipo de becas. AH fue apoyada por el Walter Boyd y Jessie & amp; Charles Scriver MD /PhD Premio Beca (Canadian Institute of Health Research Institute de Genética y la Fundación Canadiense de Gene Cure). Las fuentes de financiación no ha participado en el diseño del estudio; en la recopilación, análisis e interpretación de datos; en la redacción del informe; o en la decisión de presentar el documento para su publicación
Conflicto de intereses:. El autor correspondiente es un editor académico para PLOS ONE. Otros autores han declarado que no existen intereses en competencia.
Introducción
El cáncer colorrectal tiene una alta incidencia en los países desarrollados [1]. En 2004 esta enfermedad fue el 4
ª causa principal de muerte por cáncer con más de 600.000 muertes en todo el mundo [2]. En Canadá, es un problema de salud importante con un estimado de 22.200 nuevos casos y 8.900 muertes esperado en 2011 [3]. Existen importantes variaciones interprovinciales en las tasas de incidencia y mortalidad, y la provincia de Terranova y Labrador (NL) tiene las mayores tasas de incidencia y mortalidad estandarizadas por edad para el cáncer colorrectal entre las provincias de Canadá [3]. Tanto los factores genéticos y ambientales juegan un papel en la susceptibilidad a cáncer colorrectal. Mientras que la mayoría de los pacientes con cáncer colorrectal son casos esporádicos, casi el 5% de los cánceres colorrectales son causados por mutaciones de alto penetrante heredados [4]. El treinta y cinco por ciento del riesgo de desarrollar cáncer colorrectal esporádico también se atribuye a los factores heredados [5].
resultados del cáncer colorrectal importantes incluyen la recurrencia, metástasis y la muerte. En la actualidad, el más valioso criterio de pronóstico en pacientes con cáncer colorrectal es el (tumor-nódulo-metástasis) TNM definido por el Comité Conjunto sobre el Cáncer [6]. En general, el pronóstico del paciente empeora con el aumento de la etapa.
Una serie de parámetros clínicos y moleculares también han sido investigados por su utilidad pronóstica en el cáncer colorrectal. Por ejemplo, Popat et al [7] informó en su meta-análisis que los pacientes con tumores de inestabilidad de microsatélites-alto (MSI-H) tienen un pronóstico más favorable en comparación con los pacientes con inestabilidad de microsatélites de bajo (MSI-L) o microsatélites estables (SMS), los tumores. También se han reportado varias otras características clinicopatológicas y moleculares que se asocia con el pronóstico, tales como alto grado tumoral [8], la histología mucinosa [9], invasión linfovascular [10], la inestabilidad cromosómica [11], y la presencia de la
BRAF1
Val600Glu mutación somática en los tumores [12], aunque los informes contradictorios también se han publicado [13] - [15]. También se reportaron resultados inconsistentes sobre la asociación entre el estado de riesgo familiar y la supervivencia de pacientes con cáncer colorrectal [16], [17]. Además, los factores demográficos como el sexo y origen étnico pueden ser modificadores de pronóstico [6]. Estos factores representan sólo en parte de las variaciones en los resultados del paciente con cáncer y es posible que los factores genéticos (tales como polimorfismos de nucleótido único (SNP), de inserción /deleción (indel) polimorfismos y mutaciones somáticas) pueden influir en el pronóstico. Su investigación lo tanto, puede ayudar a la comprensión de las razones de la variabilidad de los resultados entre los pacientes y los mecanismos biológicos subyacentes
.
Varios estudios han reportado previamente asociaciones significativas entre las variaciones genéticas y los resultados en pacientes con cáncer colorrectal. En el presente estudio, se investigó 27 tales polimorfismos (Tabla 1) como posibles factores pronósticos en una cohorte de pacientes de cáncer colorrectal (cohorte de descubrimiento, n = 532) y posteriormente a prueba la validez de las asociaciones positivas en una cohorte de pacientes de cáncer colorrectal adicional (validación cohorte, n = 252).
Materiales y Métodos
Ética Declaración
Este estudio incluye dos cohortes de pacientes. Para ambas cohortes, la recopilación de los datos clínicos del paciente y muestras biológicas fue aprobado para fines de investigación por parte de las Juntas Regionales de Salud y el Comité de Investigación Humana (HIC) de la Universidad Memorial de Terranova. En la cohorte de descubrimiento, escrito el consentimiento informado se obtuvo de los pacientes reclutados o sus apoderados. El Comité de Investigación Humana de la Universidad Memorial de Terranova renunció a la necesidad de un consentimiento informado por escrito de los participantes en la cohorte de replicación. Ética aprobación de este proyecto en particular también se obtuvo del Comité de Investigación Humana de la Universidad Memorial de Terranova.
cohortes de pacientes
a) La cohorte de descubrimiento.
Esta cohorte consistió 532 pacientes con cáncer colorrectal del Registro de cáncer colorrectal de Terranova (NFCCR). NFCCR se estableció en 1999 y reclutó I-IV pacientes con cáncer colorrectal etapa 736 entre 1999 y 2003 [18]. Todos los pacientes fueron ≤ 75 años de edad y su diagnóstico fue confirmado por el examen patológico. Las características moleculares y genéticas de esta cohorte y otros detalles han sido previamente reportados por otros [19], [20]. Para todos los pacientes, los datos clínicos fueron compilados (aunque también habían desaparecido los valores de algunas variables; Tabla 2). En este estudio, 532 de los 736 pacientes con cáncer colorrectal a partir de la NFCCR se investigaron para los que el ADN genómico (extraído de sangre) también estaba disponible. Los datos del paciente sobre las características clínico-patológica, la recurrencia y metástasis, y la fecha de la muerte fueron recuperados de los informes clínicos (médicos, patología, radiología, la autopsia y los informes quirúrgicos, investigaciones de laboratorio, notas de evaluación y progreso de los médicos, informes de alta de hospitalización), el Terranova El tratamiento del cáncer y la base de datos de la Fundación de Investigación, o cuestionarios de seguimiento de los pacientes. En esta cohorte, el 62% de los pacientes fueron tratados con 5-FU quimioterapia basada en contextos adyuvante o neoadyuvante o en el momento del diagnóstico de recurrencias locales y distantes, mientras que los pacientes restantes no fueron tratados con quimioterapia, o fueron tratados con cisplatino /etopósido (n = 1). Los pacientes en esta cohorte fueron seguidos hasta abril de 2010. La mediana del tiempo de seguimiento en esta cohorte para la supervivencia global y la supervivencia libre de enfermedad fue de 6,4 y 6 años, respectivamente (Tabla 2).
b) La validación cohorte.
Esta es una cohorte retrospectiva compuesta de 280 pacientes con cáncer colorrectal recogidas de la península de Avalon de Terranova. Para los 280 pacientes han sido recogidos los datos clínicos, sin embargo ADN genómico (extraído de tejidos no tumorales) estaba disponible sólo para 252 pacientes. Por lo tanto, 252 de 280 pacientes fueron incluidos en el presente estudio. Los pacientes en esta cohorte fueron diagnosticados con cáncer colorrectal primario en un período de dos años (entre 1997-1998). Los criterios de selección de pacientes son los siguientes: a) los pacientes con carcinoma in pólipo se incluyeron sólo si el tumor invade en el tallo, b) los pacientes cuyo cáncer colorrectal fue una recurrencia de un cáncer colorrectal temprano o una metástasis de un órgano distante, y aquellos con tumores carcinoides, la poliposis adenomatosa familiar, el carcinoma in situ y carcinoma de la mucosa fueron excluidos, y c) pacientes fueron seleccionados independientemente de su edad de diagnóstico. los datos de pronóstico de estos pacientes se obtuvieron de los registros médicos y de hospital y el Centro de Terranova y Labrador de Información de Salud. En la cohorte de validación, el 34,9% de los pacientes fueron tratados con quimioterapia basada en 5-FU en la configuración de cualquiera de adyuvante o neoadyuvante o en el momento del diagnóstico de recidivas locales o distantes. Los pacientes restantes no fueron tratados con quimioterapia o fueron tratados con otros agentes tales como irinotecan, tomudex u oxaliplatino. Los pacientes en esta cohorte fueron seguidos hasta julio de 2009. La mediana del tiempo de seguimiento de esta cohorte fue de 5,4 y 3,3 años para la supervivencia global y la supervivencia libre de enfermedad, respectivamente (Tabla 2).
Selección de polimorfismos
La base de datos dbCPCO [21] (http://www.med.mun.ca/cpco/) resume la literatura sobre los marcadores genéticos estudiados por sus asociaciones de pronóstico en pacientes con cáncer colorrectal. En agosto de 2010, se realizó una búsqueda de las entradas de esta base de datos para las medidas de supervivencia (por ejemplo, la supervivencia global). Como resultado de esta búsqueda, se identificaron 31 polimorfismos. Fuera de 31, un polimorfismo (
EGFR gratis (CA)
n repetir) no se incluyó en este estudio debido a la falta de un equipo adecuado en nuestro laboratorio se requiere para obtener sus genotipos. Además, tres polimorfismos (
EGF
A61G,
TP53
Arg72Pro y
PTGS2 -
765 G /C) no pudo ser genotipo utilizando la tecnología MassArray®. Como resultado, 27 polimorfismos de 24 genes diferentes que eran a) informaron que se asocia con la supervivencia general en al menos un estudio (ya sea una sola variable o análisis multivariados) (Tabla S1 en S1 de archivos), b) adecuado para ser genotipo utilizando el genotipado técnicas utilizadas en este proyecto (por ejemplo, polimorfismos de nucleótido único, indeles, repeticiones de microsatélites, deleciones de genes), y c) ha determinado el genotipo (es decir, no dejó de ser genotipo utilizando el método MassArray®) fueron investigados en este estudio (Tabla 1).
métodos de genotipado
los genotipos de 27 polimorfismos fueron obtenidos en la cohorte de descubrimiento y los genotipos de cuatro polimorfismos que se asociaron con el sistema operativo en la cohorte de descubrimiento (
MTHFR
Glu429Ala,
ERCC5
His46His,
SERPINE1 -
675indelG, y
GSTM1
deleción del gen) se obtuvieron en la cohorte de validación. Los genotipos se obtuvieron utilizando la plataforma Sequenom MassArray®, ensayos de genotipificación de SNP TaqMan y electroforesis en gel de los fragmentos amplificados por PCR. Más detalles relacionados con los experimentos de genotipado se pueden encontrar en los métodos S1 y S2 la Tabla S1 en Archivo. Cada reacción de genotipificación incluido amplificaciones no plantilla como controles negativos. Por lo menos el 5,9% de los genotipos se duplica correctamente con una tasa mínima de concordancia del 99,7%. Las muestras con genotipos discordantes eran o re-genotipo (genotipos obtenidos mediante el uso de la genotipificación y electroforesis en gel de TaqMan® SNP de fragmentos amplificados por PCR) o excluidas del análisis (genotipos obtenidos mediante el uso de la técnica de Sequenom MassArray®). Las tasas de éxito de genotipado mínimos eran del 97,4% para la cohorte de descubrimiento y 94,44% para la cohorte de validación. En el caso de de la casa experimentos de genotipado (es decir, ensayos de genotipificación TaqMan® SNP y la electroforesis en gel de los fragmentos amplificados por PCR), genotipificación reacciones para muestras de ADN fallidos se intentaron al menos dos veces adicionales, en función de la disponibilidad de ADN.
los análisis estadísticos
a) Hardy Weinberg de prueba (HWE).
HWE prueba se realizó de forma manual para los polimorfismos mediante la prueba de Pearson Chi-cuadrado (Tabla S1 S3 en archivo) . Para los
GSTM1
y
GSTT1
deleciones de genes HWE no se probó como genotipos heterocigotos no pueden ser detectados utilizando la metodología de determinación del genotipo aplicada en este estudio.
b) los puntos finales de supervivencia.
tiempo de SG fue el tiempo desde el diagnóstico de cáncer colorrectal hasta la muerte por cualquier causa. tiempo DFS fue el tiempo desde el diagnóstico de cáncer colorrectal, hasta la aparición de metástasis, recurrencia o muerte por cualquier causa, lo que era antes. Los pacientes que no experimentaron el resultado de interés fueron censurados en el momento del último seguimiento.
c) Variables.
Las variables categóricas fueron analizadas sexo (machos frente a las hembras), la histología del tumor (mucinoso vs no mucinoso), localización del tumor (rectal vs colon), etapa (etapas II, III y IV vs etapa I), el grado del tumor (pobremente diferenciado /indiferenciada vs así /moderadamente diferenciado), invasiones vasculares y linfáticos (presente vs ausente) , riesgo familiar (riesgo alto /intermedio vs bajo riesgo), el estado de inestabilidad de microsatélites (MSI-H vs MSI-L /MSS) y
BRAF1
estado de mutación Val600Glu (presente vs tipo salvaje). Para el conjunto de descubrimiento, el estado de riesgo familiar se determinó previamente por los investigadores NFCCR utilizando el Amsterdam II y revisó los criterios de Bethesda [18]. Tumor estado de MSI y
BRAF1
análisis de estado Val600Glu También se llevaron a cabo previamente por NFCCR [19], [20], [22]. Vasculares y linfáticos invasiones están altamente correlacionados en la cohorte de descubrimiento (& gt; 95% de los tumores con invasión vascular también tenía invasión linfática). Tenga en cuenta que, en algunos modelos, los intervalos de confianza para la etapa IV pacientes fueron amplios, lo que refleja el tamaño pequeño de la muestra para este grupo de pacientes. Estos resultados deben interpretarse con precaución.
Se categorizaron los genotipos para cada polimorfismo genético asumiendo el modelo de co-dominante (es decir, homocigotos y heterocigotos alelos menores se compararon individualmente a los principales homocigotos para el alelo). En el caso de la
MTHFR polimorfismo
Glu429Ala, también se realizaron análisis multivariable bajo el recesivo (CC vs CA genotipos AA +) y la dominante (CC + CA vs genotipos AA) modelos genéticos. El
PTGS2
c.3618A /G polimorfismo se excluyó del análisis estadístico debido a su alelo menor frecuencia muy baja (1,63%). Para el polimorfismo VNTR en el
TYMS
gen (rs34743033), 0,93% de las muestras de la cohorte de descubrimiento tenía un alelo 4R raro. Estos pacientes se combinaron con genotipos 3R /3R para los análisis. La edad fue la única variable continua en nuestro análisis.
análisis d) univariante.
-tiempo hasta el evento se construyeron gráficos de supervivencia mediante el método de Kaplan-Meier y se compararon mediante el log-rank prueba.
e) el análisis multivariable.
las variables utilizadas en la construcción de los modelos multivariables finales fueron seleccionados por el método de eliminación hacia atrás para OS y DFS separado utilizando el método de regresión de Cox. Las variables seleccionadas fueron luego volvieron a entrar en los modelos finales. La hipótesis de proporcionalidad se verificó examinando el registro de menos log (log-log (S (t)))) (parcelas. También probamos la interacción entre los
genotipos MTHFR
Glu429Ala (co-dominante modelo genético) y el tratamiento con 5-FU mediante el método de regresión de Cox.
f) El análisis estratificado.
Puesto que la enzima MTHFR (por lo tanto el polimorfismo Glu429Ala mediante la modificación de la actividad enzimática MTHFR) juega un papel biológico en el 5-FU metabolismo /eficacia (véase la discusión), 5-FU estratificación se realiza sólo para este polimorfismo. Dado que este polimorfismo no se asoció con DFS, no se realizó el 5-FU análisis de la estratificación de DFS.
g) Las comparaciones de cohortes.
Para probar si las diferencias entre las características iniciales del descubrimiento y las cohortes de validación fueron significativas, se realizó la prueba de Chi-cuadrado para las variables categóricas. Desde la edad no se distribuyen normalmente en ambas cohortes, se utilizó la prueba Mann Whitney-U no paramétrica para comparar las diferencias en la distribución de la edad entre estos dos cohortes. También se realizaron análisis similares para comparar toda la cohorte NFCCR (n = 736) y la cohorte de descubrimiento (n = 532) y también a toda la segunda cohorte (n = 280) y la cohorte de validación incluyeron en nuestro análisis (n = 252).
18 PASW Statistics software versión 18.0.2 (IBM, NY, EE.UU.) se utilizó para realizar los análisis estadísticos. Todas las pruebas fueron de doble cara y el umbral de significación se fijó en p = 0,05. Para evitar resultados falsos negativos, la corrección de múltiples ensayos no se realizó en el análisis de cohorte de descubrimiento. Si bien esto también aumenta el número potencial de las asociaciones de falsos positivos, el análisis de las asociaciones detectadas en la cohorte de descubrimiento en una cohorte de pacientes adicionales (es decir, la cohorte de replicación) ayudó a eliminar los resultados falsos positivos.
Resultados
las características descubrimiento de cohortes
las características basales de la cohorte de descubrimiento se enumeran en la Tabla 2. la edad media al diagnóstico fue de 61,4 años. Un tercio (33,3%) de los pacientes había muerto y el 39% de los pacientes había experimentado recurrencia, metástasis o la muerte en el momento del último seguimiento. La cohorte descubrimiento tiene una proporción significativamente menor de pacientes en etapa IV (9,8%) en comparación con toda la cohorte NFCCR (20,9%) (p & lt; 0,001). La cohorte de descubrimiento también difería significativamente de la cohorte NFCCR en términos de proporción de tumores con vascular (p = 0,007) y las invasiones linfáticos (p = 0,021), y los pacientes fallecidos (p & lt; 0,001).
Análisis de supervivencia global en el descubrimiento de cohortes
de los 26 polimorfismos investigados, cuatro polimorfismos se asociaron significativamente con el sistema operativo cuando ajustado por sexo, edad, estadio y el estado MSI (Tabla 3). En resumen, para el
MTHFR polimorfismo
Glu429Ala, los pacientes homocigotos para el alelo C tuvieron una supervivencia más corta (HR: 1,72; IC del 95%: [1,04-2,84], p = 0,036) en comparación con los pacientes homocigotos para el alelo A . Para el
ERCC5
His46His polimorfismo, los pacientes con el genotipo TT tenían un mayor riesgo de muerte (HR: 1,78; IC del 95%: [1,15-2,76], p = 0,01) en comparación con aquellos pacientes con el genotipo CC . En el caso de la
SERPINE1 - la supervivencia
675indelG polimorfismo, los homocigotos para el alelo de menor importancia (INSG /INSG) habían aumentado (HR: 0,52; IC del 95%: [0,32 hasta 0,84], p = 0,008) en comparación con el pacientes con Delg /Delg genotipo. Genotipo distribuciones de estos tres polimorfismos estaban en HWE (p & gt; 0,05; Tabla S3 en S1 File). Además, los pacientes con al menos una copia de
GSTM1
gen tenían un mayor riesgo de muerte en comparación con los pacientes sin copia del gen (HR: 1,40; IC del 95%: [1,03-1,92], p = 0,033) (Tabla 3).
Análisis de supervivencia libre de enfermedad en la cohorte de descubrimiento
de los 26 polimorfismos, los
ERCC5
His46His y
OGG1
Ser326Cys polimorfismos se asociaron con DFS más cortos en la cohorte de descubrimiento cuando se ajusta por otras variables (tabla 4). En concreto, los pacientes homocigotos para el alelo T del
ERCC5
His46His (HR: 1,54, IC del 95%: [1.4 a 2.29], p = 0,032) y el alelo G de los
OGG1
Ser326Cys (HR: 1,81, IC del 95%: [1.8 a 3.4], p = 0,025) tenían una peor supervivencia en comparación con los principales homocigotos para el alelo
las características de validación de cohortes
las características basales. de la cohorte de validación se enumeran en la Tabla 2. la edad media de diagnóstico fue de 68,7 años. En el momento de la última visita de seguimiento el 61,5% de los pacientes había muerto y el 66,3% de los pacientes había experimentado recurrencia, metástasis o la muerte. No hubo diferencias estadísticamente significativas entre los 280 pacientes iniciales en esta cohorte y los 252 pacientes incluidos en este estudio en términos de características clínicas y moleculares (
los datos no presentados
).
Sin embargo, hay se encontraron diferencias significativas entre las cohortes de descubrimiento y validación en términos de las características clínico-patológicas. En primer lugar, hubo una mayor proporción de pacientes en estadio IV en la cohorte de validación (16,3%) en comparación con la cohorte de descubrimiento (9,8%) (p = 0,034). En segundo lugar, la edad media de diagnóstico en la cohorte de validación (68,7 años) fue significativamente mayor (p & lt; 0,001) en comparación con la de la cohorte de descubrimiento (61,4 años). Las proporciones de pacientes en términos de sexo, localización del tumor, grado, sistema operativo y el estado de DFS, vasculares y linfáticos invasiones, y el tratamiento con regímenes basados en 5-FU también fueron diferentes entre los dos grupos (Tabla 2).
Análisis de supervivencia global en la cohorte de validación
la distribución de los genotipos de cuatro polimorfismos analizados en la cohorte de validación no se desvió de HWE. Fuera de estos cuatro polimorfismos, sólo el
MTHFR polimorfismo
Glu429Ala se asoció con tiempos de supervivencia más cortos cuando se ajusta por otras variables (tabla 3). Sin embargo, en contraste con el conjunto de descubrimiento, en la cohorte de validación, los heterocigotos (Glu /Ala) tuvieron una supervivencia más corta (HR: 1,71, 95% CI: [1,18-2,49], p = 0,005) en comparación con los homocigotos para el glutamato ( Glu /Glu) (Figura 1). Así, el genotipo asociado con una peor supervivencia en la cohorte de validación (AC) era diferente de la del genotipo asociado en la cohorte de descubrimiento (CC). Por lo tanto, también se realizaron análisis multivariados se atribuya los modelos recesivos y dominantes genéticas en estos dos grupos (Tabla 3, los cuadros S4-S7 en S1 Archivo). Como resultado, en el conjunto de descubrimiento, el
MTHFR
Glu429Ala polimorfismo se asoció con el sistema operativo en el modelo genético recesivo (CC vs AC + AA; HR: 1,80; IC del 95%: [1,13-2,86], p = 0,014), pero no en el modelo genético dominante. En contraste, en el conjunto de validación, este polimorfismo se asoció con OS en el modelo genético dominante (CC + AC vs AA; HR: CI 1,56, 95%: [1.12 hasta 2.17], p = 0,009), pero no en el recesivo modelo genético. El análisis de este polimorfismo suponiendo que el modelo genético aditivo no dió asociación significativa con la SG en ninguno de los grupos (
los datos no presentados
). Por lo tanto, la asociación de la
MTHFR polimorfismo
Glu429Ala con OS en estas dos cohortes se detecta en diferentes modelos genéticos.
Los análisis exploratorios para la supervivencia global y la
MTHFR
Glu429Ala polimorfismo
Si bien este patrón interesante asociación de la
MTHFR polimorfismo
Glu429Ala con OS en dos cohortes también puede explicarse por el reducido poder estadístico para detectar los efectos de cada uno de los grupos de genotipos, también exploratorio realizado análisis adicionales para investigar otras posibilidades. En primer lugar, para comprobar si la asociación de diferentes genotipos podría deberse a la edad relativamente mayor promedio en la cohorte de validación, en comparación con la cohorte de descubrimiento (ver Discusión), se realizó un análisis multivariable en los pacientes del grupo de validación que eran menores de 75 años de edad en el momento del diagnóstico (n = 149). Sin embargo, se encontró que el patrón de asociación observada en este análisis (AC vs AA, HR: CI 2,02, 95%: [1,20 a 3,41], p = 0,008) fue similar a la obtenida en la cohorte de validación, lo que sugiere la edad de diagnóstico no era la razón de esta disparidad. En segundo lugar, ya que la eficacia de 5-FU puede ser modificado por la actividad de la enzima MTHFR (ver Discusión), también a prueba la asociación de la
MTHFR
genotipos Glu429Ala con SO en los grupos de pacientes estratificado en base a sus características de tratamiento (los pacientes tratados con 5-FU regímenes basados frente a los pacientes no tratados con ella). Curiosamente, en este análisis, hemos encontrado que cuando se ajusta por edad, estadio, estado de MSI, este polimorfismo se asoció significativamente con la SG en los pacientes no tratados con 5-FU (ambos CC vs AA y AC vs genotipos AA en el conjunto de descubrimiento y AC vs genotipos AA en la cohorte de validación), pero no en los pacientes tratados con 5-FU regímenes basados en (Tablas 5 y 6). El análisis de la interacción entre el
MTHFR
Glu429Ala polimorfismo y el estado de tratamiento con 5-FU en tanto el descubrimiento y validación de las cohortes no reveló una interacción estadísticamente significativa entre estas dos variables.
análisis de supervivencia libre de enfermedad en la cohorte de validación
en el análisis multivariable de DFS en la cohorte de validación, la asociación de la
ERCC5
His46His polimorfismo con DFS fue también detectado como sigue: en comparación con aquellos pacientes con el genotipo CC, los pacientes con TT y los genotipos CT tenían más corto DFS (HR: 1,81; IC del 95%: [1,11-2,94], p = 0,018 y HR: 1,48 IC del 95%: [01.02 a 02.17 ], p = 0,041), respectivamente (Tabla 4).
Discusión
el principal resultado de nuestro estudio es que las asociaciones de la
MTHFR polimorfismo
Glu429Ala con el general la supervivencia y el
ERCC5
His46His polimorfismo con la supervivencia libre de enfermedad fueron detectados en dos cohortes independientes de pacientes con cáncer colorrectal.
otros dos estudios han reportado también la
MTHFR
Glu429Ala polimorfismo que se asocia con el sistema operativo en pacientes con cáncer colorrectal. En un estudio realizado en una cohorte española [23], los pacientes portadores del alelo C (CA + CC genotipo) tenían una peor supervivencia que aquellos con el genotipo AA, cuando se ajusta por variables clínico. Del mismo modo, en otro estudio [24] realizó en pacientes con cáncer de colon metastásico, las pacientes con los genotipos CC AC + para el
MTHFR
Glu429Ala tenía peor SG que los pacientes de sexo femenino con genotipo AA en el análisis univariado. Sin embargo, en otros seis estudios, se observó ninguna asociación entre el
MTHFR polimorfismo
Glu429Ala y OS en el cáncer colorrectal en el análisis univariado o multivariado [25] - [30]
El papel de la. enzima MTHFR y su polimorfismo Glu429Ala en el pronóstico del cáncer colorrectal no se conocen bien. Sin embargo, se ha MTHFR biológicamente investigado con gran detalle (es decir, su papel en el metabolismo del folato y el mecanismo 5-FU de acción). Además, el polimorfismo Glu429Ala se ha demostrado previamente para causar reducción moderada de la actividad de la enzima MTHFR; los homocigotos Ala /Ala tiene cerca del 60% de la actividad de la MTHFR normal y los heterocigotos tienen ~ 80% de la actividad normal de la MTHFR [31], [32].
En el metabolismo del folato, una de las actividades biológicas de la enzima MTHFR es convertir la 5,10-metilentetrahidrofolato (5,10-MTHF) a 5-metiltetrahidrofolato (5-MTHF) [33]. 5,10-MTHF se utiliza principalmente en la síntesis de purinas y timidina, los nucleótidos utilizados por las células en división en la síntesis de ADN. Además, 5-MTHF se utiliza en la síntesis de S-adenosil-metionina (SAM), un mediador clave en una serie de reacciones de metilación, incluyendo la metilación del ADN [33]. Por lo tanto la reducción en la actividad enzimática debido a la MTHFR Glu429Ala el polimorfismo puede resultar en acumulación de 5,10-MTHF y la reducción simultánea de 5-MTHF en cierta medida (Figura 2). La acumulación de la forma 5,10-MTHF de folato puede proporcionar cantidades de nucleótidos para el aumento de la síntesis de ADN a las células tumorales que proliferan rápidamente para crecer. Esta teoría está apoyada por informes recientes que sugieren que una vez que un adenoma colorrectal se ha desarrollado, la suplementación de ácido fólico puede ayudar a su crecimiento y la progresión [34] - [37], presumiblemente mediante la facilitación de grandes cantidades de precursores de nucleótidos para el crecimiento del tumor [33], [35 ], [36]. En otro estudio, se encontró que la suplementación de ácido fólico para ser asociado con la progresión del cáncer colorrectal ya desarrollado en ratas [36]. También en el Polyp Prevention Study Aspirina /folato [34], [36], la suplementación con ácido fólico se asoció con un mayor riesgo de adenomas avanzados, así como una mayor cantidad de adenomas en pacientes con adenomas colorrectales previamente desarrollados. Estos hallazgos sugieren un efecto negativo de los altos niveles de folato en el pronóstico del cáncer colorrectal. Por lo tanto, en nuestras cohortes, la asociación de la
MTHFR polimorfismo
Glu429Ala con un peor pronóstico de los pacientes con cáncer colorrectal puede ser debido a una menor actividad de la MTHFR y la acumulación de ácido fólico que puede facilitar el crecimiento del tumor.
las flechas indican las posibles consecuencias del polimorfismo en los procesos biológicos representados.
Además, debido a la función de la enzima MTHFR ineficientes (por ejemplo, debido al polimorfismo Glu429Ala), la conversión óptima de 5,10 -MTHF a 5-MTHF también se puede reducir, haciendo que la reducción en los niveles de 5-MTHF. Esto puede en última instancia conducir a una disminución de la síntesis de SAM (Figura 2). SAM es un importante donante de metilo para un gran número de reacciones y su deficiencia puede inducir la hipometilación del ADN.