Extracto
Antecedentes
Los microARN (miRNA) regular negativamente 'no traducida (3' 3 -UTR) de codificación de genes mediante la supresión de la traducción o degradación de ARNm, y actúan como oncogenes o supresores tumorales. Recientemente, varios estudios investigaron la asociación entre el pre-miR-27a polimorfismo rs895819 y los riesgos de varios tipos de cáncer, pero los resultados fueron inconsistentes.
Metodología /Principales conclusiones
Hemos llevado a cabo un meta-análisis de 13 estudios que incluyeron 6501 casos de cáncer y 7571 controles para hacer frente a esta asociación. En general, este meta-análisis mostró que el pre-miR-27a rs895819 A /G polimorfismo no se encontró asociación significativa con el riesgo de cáncer en todos los modelos genéticos. En el análisis estratificado por tipos de cáncer, en comparación con lo ancestral alelo A, los individuos con la variante alelo G se asoció consistentemente con menor riesgo de cáncer de mama (OR = 0,92, IC del 95% = 0,85 hasta 0,99), el cáncer de células renales (OR = 0,81; IC del 95% = 0,67-0,97) y el cáncer nasofaríngeo (OR = 0,84, IC del 95% = 0,72 a 0,97). A la inversa, los individuos con los heterocigotos AG se asoció con un mayor riesgo de cáncer del tracto digestivo en comparación con el genotipo AA (AG frente a AA: OR = 1,16; IC del 95% = 1,01-1,32). En el análisis estratificado por el origen étnico, el polimorfismo rs895819 pre-miR-27a mostró una asociación estadística significativa con la disminución del riesgo de cáncer en los caucásicos (G vs. alelo A: OR = 0,90; IC del 95% = 0,83 hasta 0,97; AG frente a AA: OR = 0,84, IC del 95% = ,75-0,94; AG /GG AA vs.: OR = 0,85, IC del 95% = 0,76 hasta 0,94), pero no en los asiáticos
Conclusión /Importancia
Este meta-análisis sugiere que el rs895819 polimorfismos pre-miR-27a puede contribuir a la susceptibilidad de algunos de tipo específico de cáncer, incluyendo cáncer de mama, cáncer de células renales, cáncer de la nasofaringe y cánceres del tracto digestivo, así como las susceptibilidades de los cánceres en los caucásicos, en cierta medida
Visto:. Xu Q, El Cy, Liu Jw, Yuan Y (2013) pre-miR-27a rs895819A /G polimorfismos en el cáncer: Un meta-análisis. PLoS ONE 8 (6): e65208. doi: 10.1371 /journal.pone.0065208
Editor: Amanda Ewart Toland, Ohio State University Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: December 25, 2012; Aceptado: April 23, 2013; Publicado: 7 Junio 2013
Derechos de Autor © 2013 Xu et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este trabajo con el apoyo de subvenciones del Programa de Investigación básica clave Nacional de China (973 Programa Ref. 2010CB529304, http://www.973.gov.cn/Default_3.aspx), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Ref Nº 31200968 , http://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default152.htm), y el Proyecto de Tecnología de la Ciencia en la provincia de Liaoning (Ref Nº 2011225002, http://kjjh.lninfo.gov.cn/). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
microARNs (miRNAs) son los ARN que son 18-23 nucleótidos de longitud que participan en la regulación transcripcional de genes eucariotas [1], que se asocia con las modificaciones post-transcripcionales que conducen a la degradación del mRNA o la represión de traducción de los genes específicos [2]. genes miARN se transcriben a una forma de ARN en forma de horquilla llamado pri-miARN [3], que se procesa por una endonucleasa, Drosha, para formar una pre-miARN que es de 60-70 nucleótidos de largo [4]. Los pre-miRNAs se escinden por una endonucleasa, Dicer, para formar el miARN maduro, que funciona como un regulador de genes [5]. La variación de la primaria, pre-, y madurar miARN a través de procesos fisiológicos puede causar la incidencia y el desarrollo de un tumor.
miRNAs se transcriben a partir de un intrón del gen y /o una región intergénica. existen polimorfismos en la primaria, pre y maduran los genes miARN que pueden influir potencialmente el tratamiento de maduración miRNAs, en términos generales que afectan a la función de los genes miARN [6]. La primera investigación se centró en los polimorfismos pre-miARN proyectará 323 polimorfismos de nucleótido único (SNP) en 227 genes miARN según la bioinformática de Duan et al. [6]. A partir de entonces, los eruditos todos ellos se centran en 3 sitios de SNP en el campo de la asociación entre el miARN polimorfismo y cánceres, HSA-pre miR--146a rs2910164, rs11614913 HSA-pre-miR-196a2 y hsa-miR-499 rs374644, y varios metaanálisis informaron que estos 3 sitios estaban asociados con el riesgo de cáncer [7] - [16]. El miR-27a rs895819 A /G polimorfismo se encuentra en el bucle de la pre-miARN, y la variación de la A a la G podría causar un cambio en la energía libre mínima (MFE). Por lo tanto, este SNP puede afectar la función de los genes miARN en cierta medida. Sin embargo, los resultados en cuanto a su asociación con el riesgo de cáncer son conflictivos. La mayoría de los estudios informó de que el alelo variante podría disminuir el riesgo de cáncer [17] - [19], pero algunos estudios informaron diferentes puntos de vista. Unos pocos estudios informaron que la asociación entre la variante G alelo y el cáncer de riesgo era insignificante; estos estudios les niega el papel protector del alelo G [20] - [22]. Por otra parte, algunos estudios informaron que la variante alelo G era un alelo de riesgo. Por ejemplo, los estudios que utilizan 2 muestras del mismo continente analizaron los genotipos AG y GG para el riesgo de cáncer gástrico y se compararon con el riesgo de que para el genotipo AA de tipo salvaje. Un estudio encontró que los genotipos AG y GG aumentó el riesgo de cáncer gástrico [23], y el otro estudio se encontró el resultado opuesto [24]. Por lo tanto, aún se requiere el análisis global que integra todos los estudios individuales. Para mejorar la eficiencia de los meta-análisis sobre el riesgo de cáncer e investigar si este polimorfismo rs895819 se asoció con el riesgo de cáncer gástrico, un estudio de casos y controles no publicada sobre el cáncer gástrico que se realizó por Qian Xu et al en el tumor Etiología y Proyección Departamento de Instituto del cáncer y Cirugía general en el primer hospital Afiliado de la Universidad médica de china, Shenyang, se recogió china. En general, 13 conjuntos de datos consistieron en 6501 con los casos de cáncer y 7571 controles fueron incluidos en nuestro estudio. Estos datos deben ser combinados para ampliar nuestra comprensión del SNP rs895819 pre-miR-27a, que puede proporcionar alguna evidencia para la investigación futura. Por lo tanto, en este estudio se realizó un metanálisis para combinar todos los estudios disponibles y validar si el miR-27a A /G polimorfismo contribuye a los riesgos de cáncer.
Métodos
Publicación buscar
Una búsqueda sistemática de la literatura se realizó para todos los artículos sobre la asociación entre la pre-miR-27a polimorfismo rs895819 y el cáncer de riesgos hasta el 15 de marzo de 2013. las bases de datos PubMed, Nacional de Conocimientos chino Infraestructura (CNKI) y web de Ciencia se usaron simultáneamente. Se utilizaron las siguientes palabras clave: "miR-27a", "cáncer /carcinoma /tumor /neoplasia", "rs895819" y "polimorfismo" por dos investigadores independientes Qian Xu y Cai-Yun He. Todos los estudios cumplieron con los siguientes criterios: (1) estudio de casos y controles; (2) la asociación entre el polimorfismo y el cáncer de riesgos de miR-27a se exploró; y (3) la frecuencia del genotipo estaba disponible. Los principales criterios de exclusión fueron: (1) duplicar los datos, (2) el estudio sólo para muestras de cáncer o de enfermedad precancerosa en comparación con los controles, y (3) los sujetos en el grupo de control eran individuos de alto riesgo con algunas mutaciones genéticas
Extracción de datos
Dos de los autores (Qian Xu y Cai-Yun He) extrajeron todos los datos de forma independiente, cumplían los criterios de selección, y alcanzó un consenso en todos los artículos. Se recogieron los siguientes elementos: primer país de origen, la etnia, el tipo de cáncer, el idioma, método de genotipificación, fuente de grupos de control numérico (poblacional o de base hospitalaria) y total de casos y controles, nombre del autor, año de publicación, y genotipo distribuciones de casos y controles. Mientras tanto, los autores categorizaron cáncer gástrico, cáncer colorrectal y cáncer de hígado en el "cáncer del tubo digestivo» para el análisis estratificado.
Estadísticas
En primer lugar, las frecuencias genotípicas de polimorfismo de miR-27a de Hardy-Weinberg (HWE) se evaluaron mediante la prueba de Chi-cuadrado en los controles y un
P Hotel & lt; 0,05 fue considerado como significativo desequilibrio. La fuerza de la asociación entre el polimorfismo y el cáncer de riesgos de miR-27a se estimó mediante la odds ratio (OR) con intervalos de confianza del 95% (IC). La heterogeneidad estadística entre los estudios se probó mediante la prueba Q de base cuadrada Chi y yo
2 [25]. La heterogeneidad se consideró significativa cuando
P Hotel & lt; 0,10 se observó en la prueba Q, y yo
2 se utilizó para calificar variación en O atribuible a la heterogeneidad. Cuando existe heterogeneidad, se utilizó un modelo de efectos aleatorios basado en el método de DerSimonian y Laird para calculó el OR combinado de cada estudio [26]; de lo contrario, se empleó un modelo de efectos fijos basado en el método de Mantel-Haenszel [27]. En general, se evaluó por primera vez los riesgos entre alelo G y riesgos de cáncer en comparación con el de un alelo en el modelo codominante (AG contra AA, GG frente AA), modelo dominante (AG /GG contra AA) y el modelo recesivo (GG frente AG /AA), y la comparación alélica (G frente a A). También se realizó el análisis de la estratificación del tipo de cáncer (dividida en cáncer del tracto digestivo, cáncer de mama, cáncer nasofaríngeo y cáncer de células renales) y el origen étnico (Asia y el Cáucaso). Meta-regresión se realizó además para detectar la fuente de heterogeneidad. La varianza entre los estudios (τ
2) se utilizó para cuantificar el grado de heterogeneidad entre los estudios y el porcentaje de τ
2 se utilizó para describir el grado de heterogeneidad explicó [28]. método de correlación de rangos de la Begg se utilizó para evaluar estadísticamente el sesgo de publicación [29] (
P Hotel & lt; 0,10 fue considerado estadísticamente significativo). Todos los análisis se realizaron utilizando el software STATA, versión 11.0 (Stata Corporation, College Station, TX, EE.UU.), y todas las pruebas fueron de dos caras.
Resultados
Características de los Estudios
Un total de 20 artículos fueron encontrados por búsqueda en la literatura de la PubMed, CNKI y web of Science [17] - [24], [30] - [41], el uso de diferentes combinaciones de términos clave. Como se muestra en la Figura 1, se excluyeron nueve estudios (uno era función de estudio [34], uno era de datos reduplicate y demostramos problema de la técnica [33], dos no fueron estudiados para el polimorfismo rs895819 [31], [35], uno es el caso -sólo estudio [32], dos tenían ningún caso cualificados o los controles [17], [36], y dos eran los meta-análisis sobre el SNP rs895819 [30], [41]). Además, nuestro grupo de investigación proporciona este meta-análisis con un conjunto de datos no publicados respecto a la asociación entre el polimorfismo rs895819 y el riesgo de cáncer gástrico. En consecuencia, se incluyeron un total de 13 estudios de casos y controles extraído de 11 artículos y un conjunto de nuestros datos no publicados que cumplieron los criterios de inclusión en el meta-análisis final [18] - [24], [37] - [40], que consistía en 6501 y 7571 casos de cáncer de controles sin cáncer. La característica de cada estudio incluido se presenta en la Tabla 1. De los 13 estudios matriculados, todos fueron emparejados por edad, sexo, excepto 4 estudios para el cáncer de mama que no tiene que coincidir con el sexo; 10 estudios investigados en los asiáticos y los otros 3 estudios investigados en la raza blanca; controles en 7 estudios se basan en el hospital y los controles de los otros estudios fueron basados en la población o sujetos mixtos; genotipo métodos incluyen PCR-RFLP (3 estudios), TaqMan (3 estudios), extensión basada en PCR sola base (5 estudios) y la secuenciación directa por PCR (2 estudios). 11 de los 13 estudios revisados genotipos para el control de calidad. distribución de los genotipos de los controles en todos los estudios fue consistente con el equilibrio de Hardy-Weinberg.
Síntesis cuantitativa
En primer lugar, se combinaron todos los estudios elegibles para estimar la fuerza de asociación de mir -27a polimorfismo rs895819 con el riesgo general de todos los tipos de cánceres. No hay asociación estadísticamente significativa se encontró en todos los modelos genéticos (Tabla 2). Se realizó un análisis más detallado de estratificación basado en diferentes tipos de cáncer y diferentes etnias (Tabla 2).
En el análisis de la estratificación del tipo de cáncer, se observó la variante G alelo estar estadísticamente asociada con un menor riesgo de cáncer de mama (OR = 0,92, IC del 95% = 0,85 a 0,99). Dado que sólo un estudio se realizó en el cáncer de células renales o cáncer nasofaríngeo [19], [38], el OR agrupado no pueden apreciarse en estos dos tipos de cáncer. Sobre la base de un solo estudio, se observó que los genotipos heterocigotos AG y AG /GG fueron consistentemente asociados con la disminución del riesgo de cáncer de células renales (AG vs AA: OR = 0,70, IC 95% = 0.55-0.89; AG /GG AA vs. : OR = 0,72, IC del 95% = 0,57-0,90) y el cáncer nasofaríngeo (AG frente a AA: OR = 0,79, IC del 95% = 0,65-0,96; AG /GG AA vs.: OR = 0,79, IC del 95% = 0,66 -0,95) en comparación con el genotipo AA de tipo salvaje. Además, el alelo G se asoció con una disminución estadísticamente riesgos de cáncer de células renales (OR = 0,81, IC del 95% = 0,67-0,97) y el cáncer nasofaríngeo (OR = 0,84, IC del 95% = 0,72 a 0,97) en comparación con el alelo A . Estas observaciones insinúan una asociación inversa del alelo G con los riesgos de los tipos de tumores. Sin embargo, la comparación de AG frente a AA en digestivo subgrupo cáncer del tracto mostró un resultado opuesto. El genotipo AG se asoció con un mayor riesgo de cáncer del tracto digestivo. (AG frente genotipo AA: OR = 1,16; IC del 95% = 1,01-1,32)
En el análisis de la estratificación de la etnicidad, en comparación con el genotipo AA ancestral, los genotipos heterocigotos AG y AG /GG se asoció con una disminución del riesgo de cáncer en los caucásicos subgrupo (AG frente a AA: OR = 0,84, IC del 95% = 0,75 a 0,94; AG /GG vs AA: O = CI 0,85, 95% = desde 0,76 hasta 0,94), pero no en los asiáticos subgrupo. Se observó la misma asociación en la comparación de alelos (alelo G vs. alelo A: OR = 0,90; IC del 95% = 0,83 hasta 0,97).
La heterogeneidad
La heterogeneidad dentro de cada subgrupo se demostró en la Tabla 2. Una parte de las comparaciones mostró heterogeneidades leves o moderadas entre los estudios. Estamos posteriormente realizaron análisis de sensibilidad para explorar la influencia de estudio individual de los resultados agrupados por la eliminación de un estudio a la vez desde el análisis agrupado (Tabla S1). Los resultados no mostraron estudio individual afectó el OR agrupado de manera significativa. Por lo tanto, hemos explorado en profundidad el origen de la heterogeneidad según el tipo de cáncer, el origen étnico, el idioma, y el método de determinación del genotipo con meta-regresión en comparación alélica (G vs A). Resultados de meta-regresión revelaron que el tipo de cáncer (
P = 0,023
), pero no el origen étnico (
P = 0,452
), lenguaje (
P = 0,347
), o el método de genotipificación (
P = 0,100
) contribuyó a la fuente de heterogeneidad. Además, el tipo de cáncer podría explicarse 85,29% de la varianza entre los estudios (τ
2).
Publicación Bias
correlación de rangos de Begg se llevó a cabo para evaluar el sesgo de publicación. En la comparación de AG frente a AA y modelo dominante (AG /GG contra AA), se observó un ligero sesgo de publicación (AG frente a AA:
P = 0,020
; AG /GG contra AA:
P = 0,088
, respectivamente, Tabla 3), insinuando potencial sesgo de publicación debido a un sesgo de idioma, estimaciones infladas por un diseño defectuoso metodológica en los estudios más pequeños, y /o la falta de publicación de ensayos pequeños con resultados opuestos.
Discusión
miR-27a, que está situado en una región intergénica del cromosoma 19 (chr19:13947254-13947331), había hasta reguladas expresión en muchos tumores [42] y fue considerado ser un oncomir [43] - [45]. El uso de la reacción en cadena de conformación polimorfismo de la polimerasa de una sola cadena (PCR-SSCP) Tomiyasu Arisawa descubrió en 2007 que había un polimorfismo en la región flanqueante del gen miR-27a, y la variante G alelo frecuencia alcanzó 34,6% [36]. En el mismo año, Ranhui Duan et al. empleado un método bioinformático a la pantalla 323 SNPs, e hizo hincapié en la importancia de este SNP rs895819 debido a su ubicación en la secuencia pre-miARN [6]. Desde entonces, varios estudios de este SNP emergieron en sucesión. En 2010, Tair Kontorovich et al., Utilizando un Sequenom MassARRAY, proyectará 42 SNPs relacionados miARN-AG y se encontró que heterocigoto de rs895819 miR-27a tenían un riesgo menor de cáncer de mama /ovario en las mujeres judías [17]. Casi al mismo tiempo, Rongxi Yang et al. utilizado un método de secuenciación de observar que la variante G alelo disminuyó significativamente el riesgo de cáncer de mama familiar en una población alemana [18]. Después de eso, se sugirió que los genotipos AG y GG tuvieron una disminución del riesgo de cáncer de células renales en una población china en comparación con el AA genotipo de tipo salvaje [19]. Sin embargo, algunos estudios sostienen diferentes puntos de vista; algunos estudios consideraron la relación entre la variante G alelo y el riesgo de tumor a ser insignificante [20] - [22]. Por otra parte, algunos investigadores pensaron que la variante alelo G era un alelo de riesgo. Dos estudios inconsistentes investigó el riesgo de cáncer gástrico utilizando muestras de un mismo país. Qingmin Sun et al. encontrado que los genotipos AG y GG se asoció con un mayor riesgo de cáncer gástrico y un mayor nivel de expresión de miR-27 bis [23], pero Yuan Zhou observaron el resultado opuesto [24].
Según nuestra meta -análisis, G → Una variación en miR-27a sitio de polimorfismo rs895819 no ejerció efecto genético significativo en el riesgo de cáncer en el análisis global (Tabla 2). Además, realizó el análisis de la estratificación en función del tipo de cáncer y la etnicidad. En el análisis de subgrupos de cáncer de mama integración de 4 estudios, los sujetos que llevan G alelo de rs895819 demostraron el riesgo de cáncer reducida. Además, un estudio sobre el cáncer de células renales [19] y un estudio sobre el cáncer nasofaríngeo [38] no podría incorporarse en otros tipos de cáncer y por lo tanto se analizaron por separado como el tipo de cáncer solo en este meta-análisis. Para el cáncer de células renales y cáncer nasofaríngeo, análisis de asociación bajo el modelo codominante (AG contra AA), modelo dominante (AG /GG contra AA) y la comparación de alelos (G vs. A) apoyado consistentemente que este polimorfismo se relaciona con disminución de riesgos de ambos tipos de cáncer . La ligera diferencia de las RUP y IC del 95% entre nuestro meta-análisis y sus estudios originales fue probablemente debido a los datos en bruto disponibles para el ajuste de otros factores. Todos estos hallazgos indican que este polimorfismo puede estar asociado con una disminución de los riesgos de tipos específicos de cáncer, incluyendo cáncer de mama, el carcinoma de células renales y el carcinoma nasofaríngeo.
En el análisis de subgrupos de cáncer de tracto digestivo, sin embargo, se observó que el genotipo AG se asoció con el aumento de riesgo de cáncer. En cuanto al estudio original de una sola, Sun et al 's [23] informó de una asociación estadísticamente positiva del polimorfismo rs895819 con el riesgo de cáncer gástrico; cuatro estudios [23], [37], [38] (Qian Xu, 2013
*) mostró que este polimorfismo tendieron a ser una asociación positiva con un mayor riesgo de cánceres del tracto digestivo, aunque no alcanzó significación estadística. En este meta-análisis, incorporamos y evaluamos los datos disponibles de este polimorfismo con el riesgo de cáncer del tracto digestivo, que puede demostrar un resultado relativamente estable. La diferencia de la asociación de este polimorfismo con varios tipos de cáncer puede resultar de origen celular distinto y mecanismos patogénicos de diferentes tipos de cáncer.
Para aclarar mejor la asociación de este polimorfismo con cáncer del tracto digestivo, hemos añadido un conjunto de datos no publicados que era un estudio de casos y controles incluyendo 222 casos de cáncer gástrico y 305 pacientes gastritis superficial como controles en chino. El grupo control contenía los participantes de un programa de control de salud para la detección del cáncer gástrico en Zhuanghe región de la provincia de Liaoning, China y los pacientes que se sometieron a examen gastroscopia en el Primer Hospital Afiliado de la Universidad Médica de China, Shenyang, provincia de Liaoning, China. Todos los 527 sujetos fueron diagnosticados de forma independiente por dos patólogos de profesores. Mediante la integración publicados actualmente-6 estudios y nuestros datos recién publicados, encontramos por primera vez que este polimorfismo puede estar asociada con el cáncer del tracto digestivo, que es también una de las diferencias entre nuestro meta-análisis y meta-análisis publicados con anterioridad. Por otra parte, teniendo en cuenta la heterogeneidad relativamente obvia observada en este meta-análisis, incluso después de emplear los análisis de sensibilidad y análisis de subgrupos, se realizó un meta-regresión para estudiar más a fondo la fuente de heterogeneidad. Curiosamente, los resultados de meta-regresión indican la heterogeneidad resultado principalmente de diferentes tipos de cáncer y esta variación podría explicar la mayor parte de origen heterogeneidad. Por lo tanto, los diferentes efectos de este polimorfismo en varios tipos de cáncer no deben ser pasados por alto y sus efectos específicos sobre diferentes tipos de cáncer están garantizados para ser aclarado en futuras investigaciones
.
Las limitaciones de este estudio Debe señalarse también. En primer lugar, se agruparon los datos usando la información no ajustada, mientras que podría llevarse a cabo si la información detallada de datos original está disponible un análisis más preciso. En segundo lugar, la falta de datos original de los estudios revisados limita nuestra nueva evaluación de las interacciones potenciales, incluyendo las interacciones entre los diferentes genes y entre genes y medio ambiente factores. En tercer lugar, solamente los documentos de Inglés y Chino y nuestro estudio no publicado, se incluyeron en este meta-análisis, mientras que los informes que fueron escritos en otros idiomas y otros datos no publicados o estudios en curso no estaban disponibles, lo que puede causar cierto sesgo publicación en nuestro meta-análisis. El último pero no menos importante, el tamaño de la muestra agrupada fue relativamente limitada en este meta-análisis. Por lo tanto, este meta-análisis sólo de forma preliminar podría evaluar la asociación del polimorfismo rs895819 con cánceres reportados actualmente. Más estudios aún se requieren para obtener un resultado más fiable.
En resumen, este meta-análisis indican que el alelo G de miR-27a polimorfismo rs895819 puede estar asociado con una disminución de los riesgos de cáncer de mama, cáncer de células renales y el cáncer nasofaríngeo, así como una disminución del riesgo de cáncer en los caucásicos y heterocigotos AG podrían estar asociados con un mayor riesgo de cáncer del tracto digestivo. Para confirmar nuestros hallazgos, se requieren estudios adicionales bien diseñados en diversas poblaciones étnicas y estudios funcionales con respecto a este SNP.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
OR (IC 95%) de los análisis de sensibilidad
doi: 10.1371. /journal.pone.0065208.s001 gratis (DOC) sobre Table S2.
Lista de verificación de este meta-análisis
doi:. 10.1371 /journal.pone.0065208.s002 gratis (DOC)