Extracto
El objetivo
de nuestro estudio fue examinar las concentraciones de suero de inhibina A y la inhibina B en pacientes con cáncer de ovario en relación con las características clínico-patológicos y supervivencia a 5 años.
material y Métodos
Se incluyó a 90 pacientes con cáncer de ovario epitelial en nuestro estudio, con edades entre 45-81 años, que se sometieron a cirugía citorreductora óptima. En todos los pacientes, las concentraciones séricas de inhibina A y la inhibina B se midieron usando un inmunoensayo enzimático de tipo sándwich de dos etapas antes de la cirugía.
Resultados
En el grupo de pacientes con cáncer de ovario concentración sérica media de inhibina A era 3,87 pg /ml (0,96 a 10,09) y la inhibina B era 13,9 pg /ml (5,1 a 45,0). mediana de las concentraciones de inhibina A y B en relación con el escenario y subtipo histológico FIGO no difirieron significativamente. los niveles de inhibina A fueron significativamente mayores en los pacientes con clasificación inferior (G1 y G2) en comparación con aquellos con mayor grado G3 (p = 0,001). No hubo diferencias en las concentraciones de inhibina B en relación con la clasificación. Los análisis de Kaplan-Meier demostró que no hubo diferencias en la tasa de supervivencia en relación con los niveles de inhibina A, mientras que hubo un deterioro gradual de supervivencia a 5 años con un mayor nivel de inhibina B. En el grupo de pacientes con niveles de inhibina B superior a 20 pg /ml, la tasa de supervivencia fue menor (p = 0,00625, prueba de log-rank).
Conclusión
1. inhibina A los niveles séricos más altos se encontraron en pacientes con carcinoma de ovario altamente diferenciada en comparación con el grupo de pacientes con un cáncer poco diferenciado, que puede confirmar la influencia de la inhibina A en los procesos de proliferación celular. 2. Un gran importancia de la inhibina B se demostró en la predicción de muerte en menos de un período de cinco años. La probabilidad de supervivencia en pacientes que ofrecen altos niveles de inhibina B fue menor con significación estadística. Esto puede indicar la necesidad de realizar más estudios sobre la manera de bloquear la ruta de activación inhibina B en la terapia de carcinoma de ovario
Visto:. Walentowicz P, M Krintus, Sadlecki P, M Grabiec, Mankowska-Cil A, A Sokup , et al. (2014) niveles séricos de inhibina A y la inhibina B en cáncer de ovario epitelial pacientes. PLoS ONE 9 (3): e90575. doi: 10.1371 /journal.pone.0090575
Editor: Surinder K. Batra, Universidad de Nebraska Medical Center, Estados Unidos de América
Recibido: 8 de noviembre de 2013; Aceptado: February 1, 2014; Publicado: 5 Marzo 2014
Derechos de Autor © 2014 Walentowicz et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Los autores no tienen el apoyo o la financiación para reportar
Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
cáncer de ovario
epitelial es la quinta causa principal de muerte. de mujeres en Europa y los Estados Unidos [1]. Aunque la comprensión de cáncer de ovario se ha mejorado mucho, la etiología y el curso de la enfermedad siguen siendo desconocidos [2]. Las condiciones que permiten a las células cancerosas para iniciar metástasis a sitios distantes representan un problema clínico importante, pero aún poco conocidos. Por otra parte, a pesar de que los nuevos marcadores fueron introducidos en la práctica clínica, más del 70% de los pacientes presentan enfermedad avanzada (estadio III o IV), y las tasas de supervivencia a largo plazo son bajos (sólo alrededor del 30%) [3], [4 ], [5].
las inhibinas fueron originalmente aislados de fluidos gonadales en función de sus respectivas capacidades para inhibir la secreción de la hormona folículo estimulante (FSH) de la pituitaria. Posteriormente, estas proteínas se identificaron como miembros de una familia de factores de crecimiento, la superfamilia de factor de crecimiento transformante beta (TGF), con múltiples funciones como reguladores locales de la biología gonadal [6], [7]. La inhibina A e inhibina B pertenecen a un pequeño subgrupo de la superfamilia TGF-β que actúan como antagonistas y son homólogos estructurales de activinas, que comprende la activina β-subunidad y una α-subunidad única. Heterodimerización da lugar a la inhibina A (α /ßA) y B (α /βB) [8], [9]. En su estructura, la inhibina madura el dímero A es similar a la activina A [10].
inhibinas bloquear las acciones de la activina en la pituitaria [11]. Compartiendo la β-subunidad, la inhibina puede unirse activina de tipo II receptores, con una menor afinidad [12]. Un proteoglicano unida a la membrana, betaglicano, actúa como un co-receptor inhibina y por otra parte betaglicano se ha caracterizado como un receptor accesorio para ligandos de TGF-β relacionados, TGF-β1, -β2 y -β3 [13]. En presencia de betaglicano, inhibina forma un complejo de alta afinidad con el receptor de activina de tipo II [13]. Esta interacción inhibe el acceso de activina a su tipo II receptores, y bloquea la cascada intracelular [14] de señalización.
El hecho de que las inhibinas expresión está restringida a las células de la granulosa ovárica en las mujeres, llevó a establecer los niveles de inhibina como un suero útil marcador de tumores de células granulosas (GTC).
además, como la inhibina a y B pertenecen a la familia de factores de crecimiento transformante y sus representantes desempeñan un papel importante en la carcinogénesis del cáncer de ovario, puede ser la hipótesis de que también podrían desempeñar un papel en la carcinogénesis de ovario. Se demostró que algunas regiones de genes que codifican las inhibinas tienden a verse afectada en los carcinomas de ovario, sin embargo, una relación entre estos daños y procesos de carcinogénesis en pacientes con cáncer de ovario epiteliales no ha sido dilucidado [15]. Uno de los mecanismos sugeridos que participan en la carcinogénesis del carcinoma de ovario es la vía de perturbaciones activina resultado de la disminución de expresión de beta-glucanos. De manera similar a otros neoplasmas, cáncer de ovario se caracteriza por la pérdida de expresión de β-glucano, sin embargo, el papel de la vía de la activina, y las interacciones entre las inhibinas, activinas y otros componentes de la familia TGF-β, siguen siendo poco clara [15].
Teniendo en cuenta estos hechos, el objetivo de este estudio fue examinar la inhibina a y la concentración de inhibina B en el suero de pacientes con cáncer de ovario epitelial en relación con las características clínico-patológicas, tales como un subtipo patológico del tumor, estadio FIGO, la clasificación, el estado de la menopausia y la supervivencia global a los 5 años.
Los pacientes
Se incluyó a 90 pacientes con cáncer de ovario epitelial de entre 47-81 años (media 59,6 +/- 10,3 años) tratados en el Departamento de Ginecología y Obstetricia, Ludwik Rydygier Collegium Medicum en Bydgoszcz en el período de 2005-2006. Todas las mujeres eran posmenopáusicas.
Sólo las mujeres que se sometieron a cirugía citorreductora óptima se consideraron para su posterior análisis, todos ellos con cancerosa residual se centra menos de 1 cm de diámetro. Todos los pacientes fueron operados por el oncólogo ginecológico experimentado. El protocolo quirúrgico estándar incluido tumorectomía, histerectomía con salpingoovariectomy bilateral, linfadenectomía pélvica, omentectomía y apendicectomía. Federación Internacional de Ginecología y Obstetricia sistema de estadificación del cáncer de ovario (FIGO) se utilizó para evaluar el estadio clínico de la enfermedad. Las primeras etapas fueron confirmados en 26 pacientes (FIGO I en 16 mujeres, II en 10) y la enfermedad avanzada en 64 pacientes (FIGO III-56, IV-8). Todos los casos de cáncer de ovario fueron con confirmación histológica, de los cuales 68 (75%) serosa, 7 (8%) y 15 mucinoso (17%) endometrioide. El examen histológico se realizó en el Departamento de Patología, Hospital de la Universidad de Bydgoszcz, y la clasificación histológica se determinó (G1 en el 13, G2 y G3 en 28 en 49 pacientes)
.
Después de la cirugía citorreductora óptima, todas las mujeres se sometieron a 6 cursos de la quimioterapia con carboplatino y paclitaxel. Las características basales de los participantes en el estudio se muestran en la Tabla 1.
El Comité de Bioética en el Colegio Ludwik Rydygier Medicum, Universidad Nicolás Copérnico en Torun han revisado y aprobado este estudio. Todos los participantes han proporcionado, el consentimiento informado por escrito.
Métodos
fueron recogidos
Las muestras de sangre (10 ml) después de la admisión en el hospital, el día antes de la cirugía. Después de la centrifugación se obtuvo en el suero condiciones estándar, se dividió en alícuotas y se almacenó a -70 ° C hasta el ensayo.
Las concentraciones en suero de inhibina A y la inhibina B se midieron usando una de dos sitios de dos etapas de tipo sándwich de inmunoensayo amplificado enzimáticamente ( inhibina-A /B ELISA; Diagnostic Systems Laboratories, Inc., Webster, Texas, EE.UU.). La imprecisión del ensayo para la inhibina A era 6,2% a 23 pg /ml y 3,0% a 781 pg /mL. Las concentraciones más bajas de inhibina A en una muestra de lo que podría ser detectados fue de 1 pg /ml (límite inferior de detección). Como valor de referencia para las mujeres mayores de 45 años que aceptamos la inhibina Una concentración de 1 a 3,88 pg /ml.
Coeficientes de variación con controles séricos de inhibina B
intra- e inter-ensayo fueron de aproximadamente 3,5% -5,6% y el 6,2% -7,6%, respectivamente. El límite inferior de detección fue de 6 pg /ml. Ensayo rango medido para la inhibina B era 10 a 531 pg /ml.
Se utilizó la prueba de Kolmogorov-Smirnov para evaluar la normalidad de la distribución de los parámetros investigados. Los datos se expresaron como media ± desviación estándar y la mediana con los percentiles 25º-75º. La comparación entre los grupos se realizó mediante la prueba de Mann-Whitney y el test de Kruskal-Wallis para no gaussiana variables de distribución con el análisis post hoc de Dunn. valor de P & lt; 0,05 se consideró estadísticamente significativa
En general la tasa de supervivencia fue examinado utilizando importancia para la prueba de log-rank y curvas de Kaplan-Meier
univariante y multivariante de Cox se realizaron regresiones... Para el análisis, se aplicó una selección hacia adelante con un valor de p menor de 0,05 para la entrada. Los efectos de las variables se expresaron como cocientes de riesgos por cambio de 1 SD para permitir una mejor comparación entre los tamaños del efecto de las diferentes variables analizadas.
Todos los análisis estadísticos se realizaron con Statistica 10.0 para Windows (StatSoft, Tulsa , OK, EE.UU.).
resultados
En el grupo de pacientes con cáncer de ovario concentración sérica media de la inhibina A fue 3,87 pg /ml (0,96-10,09) y la inhibina B fue de 13,9 pg /ml (5,1 a 45,0).
La concentración mediana de suero de inhibina a y B en relación con la etapa FIGO no difirió significativamente. Sin embargo, hubo una tendencia a la significación estadística de la inhibina A (Tabla 2).
suero Median inhibina A niveles fueron significativamente mayores en los pacientes con clasificación inferior (G1), así como en pacientes con G2 en comparación con aquellos con mayor grado G3 (p = 0,001). Teniendo en cuenta las concentraciones de inhibina B en suero en relación con la clasificación, no hubo diferencias observadas (Tabla 3).
No se encontraron diferencias significativas entre las concentraciones de inhibina A y B y subtipo histológico del tumor (Tabla 4) .
Se evaluaron las curvas ROC para evaluar la precisión diagnóstica de las variables investigadas para la predicción de la muerte dentro de los cinco años (Tabla 5, Fig. 1). Se encontró que el más alto nivel de discriminación para la inhibina B (área bajo la curva [AUC] = 0,705), sin embargo, esto no fue significativamente diferente de la exactitud diagnóstica de otras dos variables: edad (AUC = 0,629), y la inhibina A (AUC = 0,640)
Por otra parte, la asociación entre la inhibina a, inhibina B y la tasa de supervivencia fue también realizó de acuerdo con el análisis univariable y multivariable de regresión de Cox (incluyendo variables tales como:. edad, subtipo histológico (serosa), de alto grado (G2 + G3), FIGO etapa avanzada (Tabla 6, 7). grado y estadio FIGO avanzada fueron estadísticamente importantes factores pronósticos en el análisis univariante de la supervivencia global (Tabla 6). en el análisis multivariante sólo advanced estadio FIGO fue estadísticamente importante (Tabla 7).
Por otra parte, el método de Kaplan-Meier se realizaron análisis. No hubo diferencias en la tasa de supervivencia en relación con los niveles de inhibina a (Figura 2). el Kaplan análisis -Meier demostraron un deterioro gradual de cáncer de supervivencia a 5 años con un mayor nivel de inhibina B. El log-rank test mostró diferencias significativas entre la concentración de inhibina B y la supervivencia; en el grupo de pacientes con niveles de inhibina B superior a 20 pg /ml, la tasa de supervivencia fue menor (p = 0,00625, log-rank test) (Figura 3).
Discusión
el cáncer de ovario sigue siendo un problema sustancial de la presente ginecología oncológica asociado con un diagnóstico tardío, una baja eficacia del tratamiento y una alta mortalidad. Los nuevos métodos de diagnóstico de carcinoma de ovario se introducen en una base regular, sin embargo este tipo de acciones no mejoran significativamente los resultados del tratamiento [16]. Es de gran importancia para la búsqueda de nuevos factores que nos permitan pronosticar los resultados del tratamiento y para ayudar a seleccionar un grupo de pacientes de sexo femenino con el mal pronóstico que requieren una terapia más agresiva.
En nuestro estudio, hemos han evaluado los niveles séricos de hormonas que pertenecen a la familia TGF-β, es decir, inhibina a e inhibina B. se encontró que las concentraciones de a y B de la inhibina no difirieron significativamente en función del nivel de desarrollo clínico (etapa FIGO) y el tipo de examen histopatológico. los niveles de inhibina A no se correlacionaron con una tasa de supervivencia a 5 años. Debido a nuestro conocimiento que somos los primeros en haber evaluado los niveles de inhibina A con respecto a la tasa de supervivencia a 5 años en mujeres con carcinoma epitelial de ovario. Hay algunos informes en la literatura sobre la inhibina A nivel en pacientes afectados por carcinoma de ovario epitelial. En su estudio, Roberts et al. plasma sanguíneo demostrado elevada concentraciones de inhibina subunidad alfa en pacientes con carcinoma de ovario [17]. Los autores no encontraron ninguna relación entre la inhibina A y las características clinicopatológicas del tumor, lo que está en línea con nuestros propios estudios.
Sin embargo, hemos demostrado una correlación positiva entre el aumento de los niveles de inhibina A y el nivel de histológica diferenciación. En el subgrupo de pacientes, en los que el tumor se caracteriza por un bajo grado (G1), se observaron los niveles más altos de la inhibina A (8,23 pg /ml para G1 vs 0,96 pg /ml para G3, p = 0,001).
Knight y Glister demostraron que el equilibrio entre las inhibinas y activinas, producida por las células granulares, es esencial en la regulación de numerosos factores relacionados con el desarrollo folicular incluyendo la proliferación celular [18]. Tal vez, si se produce un desequilibrio en un sistema de este tipo, que afectaría a una mayor proliferación de las células de carcinoma de ovario
.
diferencias En base a los resultados del estudio, que hemos encontrado en los niveles de inhibina A en las mujeres afectadas por el cáncer de ovario, mientras que no hubo diferencias de los niveles de inhibina B entre ellos. Tal vez, este fenómeno es - en cierta medida - relacionado con el trastorno de proliferación de células tumorales en pacientes con carcinoma de ovario. Consideramos que debe ser confirmado por otros estudios que también incluye la evaluación de los niveles de activina.
Nuestros estudios son trabajos pioneros sobre el papel de la inhibina A en el carcinoma de ovario epitelial. Por primera vez, tuvimos mala suerte para confirmar la intencionalidad de la inhibina A nivel de la evaluación de rutina en la predicción de las características clínico-patológicas de los pacientes afectados por el cáncer de ovario epitelial.
Hemos estudiado también los niveles de inhibina B, otro la hormona que pertenece a la familia del TGF-β. los niveles de inhibina B no revelaron diferencias estadísticamente significativas en función del grado de desarrollo clínico, el nivel de malignidad histológica y el tipo histológico de cáncer. Sin embargo, el uso de los ROC (Curvas de funcionamiento del receptor), hemos encontrado una correlación entre un nivel de inhibina B plasma sanguíneo preoperatorio y un tiempo de supervivencia a 5 años. Al llevar a cabo un análisis del tiempo de supervivencia con la ayuda de las curvas de Kaplan-Meier, hemos observado un tiempo significativamente más corto hasta la muerte en el grupo de pacientes con niveles de inhibina B más de 20 pg /ml.
Debido a nuestro conocimiento fuimos los primeros en haber analizado una asociación entre los niveles de inhibina B y el tiempo de supervivencia de los pacientes. En la literatura disponible, no hemos encontrado informes sobre el efecto de la inhibina B en el tiempo de supervivencia de los pacientes con carcinoma de ovario. Pensamos que el aumento del nivel de inhibina B puede ser presumiblemente debido a la obstrucción de la vía de transducción de señales de la activina. Algunos autores sugieren que la vía de señal de activina ejerce un efecto inhibidor sobre el crecimiento tumoral, muy similar a la acción de TGF-β en las células epiteliales normales. El debilitamiento de la actividad activina puede conducir a la pérdida de la capacidad inhibidora de la enzima inducida en el crecimiento, y la sobreproducción inhibina B. Una expresión de β-glucano reducida puede ser un posible mecanismo intermediario implicado en este proceso, sin embargo las interacciones entre los agentes que participan respectivas de la familia TGF-β son inusualmente compleja [19]. Tanto la inhibina A e inhibina B se unen exclusivamente en el sitio de unión situado en la región proximal de la membrana de la célula [20] glicano β-, [21]. Se ha puesto de manifiesto que los sitios de unión son comunes para las inhibinas y otros componentes de la familia TGF-β, sin embargo, diferir entre sí mismos el uno al otro con respecto a los residuos de aminoácidos específicos característicos para los factores respectivos [20]. Parece ser probable que la inhibina A e inhibina B presentan una afinidad diferente para β-glucano [22]. La inhibina A se une con una mayor afinidad para el receptor de β-glucano y tipo II en contraste con la inhibina B [23]. Sin embargo, la inhibina B se caracteriza por una mayor capacidad para antagonizar la liberación de FSH de la glándula pituitaria, que es indicativo de una posible unión a la inhibina de activina de tipo B receptor II a través de otra vía [22].
Postulamos que mediada activin detención del crecimiento acompañado por una consiguiente elevación de las concentraciones de inhibina, posiblemente, puede constituir una etapa importante en la carcinogénesis del carcinoma de ovario.
la inhibina a, que pertenece a la familia de TGF, tiene un impacto en la NF-kB (factor nuclear kappa -cadena ligera-potenciador de células B activadas) y la vía de señales. NF-kappa B es un complejo de proteína que actúa como factor de transcripción. la activación de la vía de señalización NF-kB se produce en los tumores de carcinoma de ovario de origen epitelial [24]. La iniciación de este proceso puede ser no sólo debido a una mutación, sino también a la presencia de inductores de proceso inflamatorio en el microambiente tumoral. Como resultado de NF-kB activación de la vía, los genes diana responsables de una mayor proliferación, infiltración, metástasis y la angiogénesis conseguir activados [25]. Los procesos mencionados anteriormente determinan un fenotipo agresivo del tumor [26], [27].
Los componentes de TGF-β superfamilia frecuencia ejercen una acción sinérgica con la FSH, por lo tanto, es crucial tener en cuenta el hecho de que una número de vías de transducción de señal se puede activar de forma simultánea. Se ha encontrado que la activina, a través de Smad2 /3 receptores, activa Akt PI3, existente en los carcinomas ováricos epiteliales, y afecta a la sobreexpresión de genes antiapoptóticos [28], [29]. interacciones complicadas entre inhibina, activina, los estrógenos y la vía de señalización NF-kB se han demostrado [30]. Es comúnmente conocido que los factores de la familia TGF-beta y estrógenos juegan un papel fundamental en las funciones ováricas, sin embargo papel de NF-kappa B todavía sigue siendo oscuro [31], [32], [33]. Por otra parte, es probable que la inhibina, activina, estrógenos y NF-kB juegan algún papel en la patogénesis del carcinoma de ovario. Mecanismos subyacentes a este proceso cubren el deterioro de la proliferación y la apoptosis. Cada una de las vías de transducción de señales descritas anteriormente contiene factores mutuos. Por lo tanto, sus interacciones cruzadas son posibles.
Cáncer de ovario
epitelial sigue siendo una de las enfermedades más agresivo, sobre todo en las mujeres de un nivel socioeconómico alto que viven en los países industrializados. Durante los últimos años, junto con un desarrollo intensivo de la biología molecular, se han publicado numerosos estudios sobre el mecanismo de la carcinogénesis de ovario [34], [35]. A pesar de ello, la enfermedad se diagnostica a menudo después de las células tumorales han difundido dentro de la cavidad peritoneal, en las últimas etapas de desarrollo clínico, y el porcentaje de pacientes tratados con éxito se ha mantenido casi sin cambios en un nivel desde hace varias décadas. cáncer epitelial de ovario es una enfermedad agresiva para los que hay pocos biomarcadores y terapias eficaces [36].
Importancia de la inhibina A y la inhibina B en el cáncer epitelial de ovario es relevante. La alteración de la vía de la inhibina /activina puede contribuir al desarrollo de cáncer de ovario epitelial debido a la alteración de la diafonía entre granulosa y las células epiteliales. En su reciente Tournier estudios en al. identificado una única mutación de novo (c.1157A & gt; G /p.Asn386Ser) dentro del gen que codifica la INHBA ßA subunidad de inhibinas /activinas, que desempeñan un papel clave en el desarrollo de ovario [36]. Además, en una cohorte de 62 casos, detectaron una mutación de línea germinal no declarada adicional del gen INHBA (c.839G & gt; A /p.Gly280Glu). Los autores proporcionan argumentos que indican que las mutaciones en la línea germinal de inhibina contribuyen al determinismo genético de los tumores epiteliales de ovario mediante la alteración de la producción de inhibina /activina. Los resultados obtenidos por los autores sugieren fuertemente que las mutaciones inhibina contribuyeron al determinismo genético de los tumores epiteliales de ovario [37]. El impacto de la mutación INHBA en la producción de inhibina /activina y el papel de la vía de la inhibina en los ovarios y la carcinogénesis de ovario es de gran conclusión interest.In, basado en nuestros estudios, hemos observado menor de 5 años la tasa de supervivencia en el grupo de pacientes con niveles de inhibina B por encima del límite superior de la normalidad. Tal vez, la evaluación de la inhibina B en la práctica clínica podría ayudar a encontrar a un grupo de pacientes con cáncer de ovario epitelial, en los que los pronósticos son lo suficientemente mala para utilizar los métodos de tratamiento más agresivo. Esta presunción requieren más estudios, incluyendo los que están en las posibilidades de bloquear las vías de activación de inhibina B en la terapia de cáncer de ovario. También hay que prestar atención al hecho de que en el grupo estudiado de los pacientes más que el nivel de desarrollo clínico, según la FIGO, fue un predictor independiente de las tasas de supervivencia a 5 años sobre la base de un análisis multivariable, que pone de relieve un papel esencial de realizado correctamente estadificación quirúrgica.
con suerte, los estudios realizados por nosotros conducirá al desarrollo de nuevos ensayos de diagnóstico que permiten una predicción más precisa de los resultados del tratamiento del cáncer.
Conclusiones
1. inhibina A los niveles séricos más altos se encontraron en pacientes con carcinoma de ovario altamente diferenciada en comparación con el grupo de pacientes con un cáncer poco diferenciado, que puede confirmar la influencia de la inhibina A en los procesos de proliferación celular.
2. Un gran importancia de la inhibina B se demostró en la predicción de muerte en menos de un período de cinco años. La probabilidad de supervivencia en pacientes que ofrecen altos niveles de inhibina B fue menor con significación estadística. Esto puede indicar la necesidad de realizar más estudios sobre la manera de bloquear la ruta de activación inhibina B en la terapia de cáncer de ovario.