Extracto
Objetivo
El cáncer de esófago fue la quinta cáncer más comúnmente diagnosticado y la cuarta causa principal de muerte por cáncer en china en 2009. los factores genéticos pueden desempeñar un papel importante en el carcinoma esofágico de células escamosas carcinogénesis (CECA).
diseños y métodos
Para evaluar el efecto
p21
,
p53
,
TP53BP1
y
p73
polimorfismos de nucleótido único (SNPs) en el riesgo de CECA, se realizó un estudio de casos y controles de base hospitalaria. Se reclutó un total de 629 casos y 686 controles CECA. Sus genotipos se determinaron utilizando el método de reacción de detección de ligadura (LDR).
Resultados
Cuando el
p21
rs3176352 genotipo GG homocigotos se utilizó como grupo de referencia, el genotipo CC se asociado con un aumento significativo del riesgo de CECA. Cuando el
P73
rs1801173 CC homocigotos genotipo se utilizó como grupo de referencia, el genotipo CT se asoció con un aumento significativo del riesgo de CECA. Después de la corrección de Bonferroni, para
p21
rs3176352 G & gt; C, el
p
correcta todavía era significativa. Para los otros seis SNPs, en todos los modelos de comparación, no se observó ninguna asociación entre los polimorfismos y el riesgo de la CECA
Conclusiones
p21
rs3176352 G & gt;. C y
p73
rs1801173 C & gt; T SNP están asociados con un mayor riesgo de CECA. Para confirmar los resultados actuales, se requieren estudios más amplios, adicionales y caracterización biológica específica de tejido
Visto:. Zheng L, Tang W, Y Shi, Chen S, Wang X, Wang L, et al. (2014)
p21
rs3176352 G & gt; C y
P73
rs1801173 C & gt; T polimorfismos están asociados con un mayor riesgo de cáncer de esófago en una población china. PLoS ONE 9 (5): e96958. doi: 10.1371 /journal.pone.0096958
Editor: Ralf Krahe, Universidad de Texas MD Anderson Cancer Center, Estados Unidos de América
Recibido: 13 Enero, 2014; Aceptado: April 12, 2014; Publicado: 12 de mayo de 2014
Derechos de Autor © 2014 Zheng et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Financiación:. Este estudio fue apoyado en parte por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81370001, 81371927, 81101889, 81000028), Jiangsu Fundación de Ciencias Naturales Provincia (BK2010333, BK2011481), Fundación de Desarrollo Social de Zhenjiang (SH2010017) y Changzhou jóvenes talentos y la Fundación de Ciencia-Tecnología de Oficina de salud (QN201102) y el hospital de personas afiliadas del fondo de la Universidad de Jiangsu (Y200913). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito
Conflicto de intereses:.. Los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Introducción
a medida que la cuarta causa principal de muerte por cáncer y el quinto cáncer más común diagnosticado en china en 2009 [1], la tasa de 5 años de supervivencia de cáncer de esófago es muy pobre y cuentas sólo el 12,3% en 23 Europea países [2]. Más de 90% cánceres de esófago son el carcinoma de células escamosas de esófago (CECA). Además de los factores de riesgo ambientales como el tabaquismo y el consumo excesivo de alcohol, polimorfismos de nucleótido único (SNP) como los factores genéticos podrían desempeñar un papel importante en la carcinogénesis CECA [3].
proteína p53 supresor de tumor es frecuentemente mutado en diversos tipos de cánceres y está implicado en la proliferación celular y la progresión del tumor [4]. El
p53
gen está en el cromosoma 17p13.1. Un bien estudiado
p53
polimorfismo, Arg72Pro (rs1042522 C /G; R /P) se ha informado que tienen importancia funcional [5], [6]. En comparación con la proteína de tipo salvaje Arg, la proteína Pro alelo variante codificada es más eficiente en la inducción de genes de reparación del ADN expresión nuclear [7]. El polimorfismo
p53
rs1042522 G & gt; C se ha asociado con el riesgo de numerosos tipos de cáncer [8]
P21 (Waf1 /Cip1 /CDKN1A), un inhibidor de CDK no específica y una clave. mediador de la detención del ciclo celular G0-G1, se upregulated de p53 de tipo salvaje. funciones de p21 durante la reparación de genes y la angiogénesis [9]. detención del ciclo celular en el punto de restricción de la fase G1-S está mediada por p21 regulación inducida por p53, y las ciclinas G1-CDK2 complejos de inhibición asociada [10]. En las células deficientes en p53, p21 interactúa con antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) y hace que ambos G1 y G2 del ciclo celular detención [11]. Mediante la inhibición de la replicación del ADN PCNA-dependiente, la expresión de p21 puede suprimir el crecimiento tumoral y la reparación de genes in vitro [12].
p21
codifica una proteína de 21 kDa, se localiza en el cromosoma 6p21.2 y consta de tres exones y dos intrones [13].
proteína tumoral 53-proteína de unión (1) interactúa TP53BP1 específicamente de
p53
y participa tanto en la reparación del ADN y el control del ciclo celular. Cooperando con los sensores y transductores de señales de daños, TP53BP1 ayuda a mediar el puesto de control de daños del ADN [14].
P73
acciones estructurales y las similitudes funcionales a
p53
.
p73
está localizado en 1p36.33, mapeo a una región que a menudo se elimina en tipos de cáncer [15]. p73 activa la transcripción de genes p21- y sensible a p53, que participan en el control del ciclo celular, reparación del ADN, la apoptosis e inhibe el crecimiento celular de una manera p53-como mediante la inducción de apoptosis o G1 detención del ciclo celular [16], [17]. Esto sugiere que p73 tiene funciones supresores de tumores. De lo contrario, el
P73
gen tiene algunas diferencias significativas de p53. En contraste con los ratones deficientes en p53, los que carecen de
P73
no muestran una mayor susceptibilidad a la tumorigénesis espontánea [18].
Las variaciones genéticas en los genes de la vía de p53, como
p21
,
p53
,
TP53BP1
y
p73
, puede contribuir al desarrollo de la CECA. En un estudio de casos y controles de base hospitalaria, hemos realizado análisis de genotipado de ocho funcional
p21
,
p53
,
TP53BP1
y
P73
SNPs en 629 CECA casos y 686 controles en una población china.
Materiales y Métodos
la aprobación ética del protocolo de estudio
los datos se han depositado en los archivos de información de apoyo. En cuanto a la conducta ética de la investigación con sujetos y /o animales humanos, cumplimos con la Declaración de la Asociación Médica Mundial de Helsinki. La junta de revisión de la Universidad de Jiangsu (Zhenjiang, China) aprobó este estudio de casos y controles de base hospitalaria. escrito el consentimiento informado fue proporcionada por todos los sujetos en el estudio.
Pacientes y controles
Entre octubre de 2008 y diciembre de 2010, del Hospital Popular Afiliado de la Universidad de Jiangsu y el Hospital Afiliado de la Universidad de Jiangsu (Zhenjiang , china), 629 pacientes con cáncer de esófago fueron reclutados consecutivamente. Mediante patológicos, todos los casos de cáncer de esófago se les diagnosticó la CECA. Los criterios de exclusión fueron: pacientes que previamente tenían cáncer; cualquier metástasis de cáncer y la radioterapia o la quimioterapia. 686 pacientes sin cáncer fueron emparejados a los casos con respecto a la edad (± 5 años) y sexo, como controles. Los controles fueron reclutados de los dos hospitales anteriormente mencionados en el mismo período de tiempo. La mayor parte de los controles estaban siendo tratados por traumatismos (incluyendo 612 pacientes con traumatismos, 45 pacientes de enfermedades infecciosas y 29 pacientes con hipertensión).
El uso de un cuestionario previo a la prueba, los entrevistadores capacitados en tela de juicio cada sujeto personal y obtener información de los datos demográficos ( por ejemplo, edad, sexo) y los factores de riesgo relacionados (como el tabaquismo y consumo de alcohol). Se recogieron muestras de sangre venosa (2 mL) después de la entrevista de cada sujeto. La definición de "fumadores" estaba fumando un cigarrillo al día durante & gt; a 1 año. La definición de "bebedores de alcohol" fue el consumo ≥3 bebidas alcohólicas a la semana durante & gt; 6 meses
Aislamiento de ADN, la selección de los SNP y genotipado mediante la reacción de detección de ligadura (LDR)
Desde su conjunto. sangre, se aisló el ADN genómico [19]. La selección 8 SNPs se basa en los artículos publicados anteriores con la consideración funcional [20], [21], [22], [23]. Con el apoyo técnico del Shanghai Biowing Biotecnología Aplicada de la empresa, las muestras fueron genotipo utilizando el método LDR [24]. En 160 (12,17%) muestras seleccionadas al azar con una alta calidad de ADN, análisis repetidos fueron realizados para el control de calidad.
Los análisis estadísticos
Uso de la
χ
2 test , entre los casos y controles, la distribución de las características demográficas, variables seleccionadas, y genotipos de la
p21
,
p53
,
TP53BP1
y
p73
se evaluaron variantes diferencias. Utilizando análisis de regresión logística, se estimaron las asociaciones entre los ocho SNPs y riesgo de CECA para las RUP crudo y ajustado RUP al ajustar por edad, sexo, tabaquismo y el estado de la bebida. Debido al número de comparaciones, se aplicó el procedimiento de corrección de Bonferroni. Por una bondad de ajuste
χ
2 prueba, el equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE) se puso a prueba para comparar las frecuencias genotípicas observadas con las esperadas entre los sujetos de control. Con SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, EE.UU.), se realizaron todos los análisis estadísticos.
Resultados
Características de la población estudiada
Los casos y controles " características se resumen en la Tabla 1. Por la
χ
2 pruebas, los casos y los controles se adaptan adecuadamente a la edad y el sexo. Entre los casos y los controles, se detectaron diferencias significativas en el estado de fumar y beber, que se muestra en la Tabla 1. La información primaria para ocho genotipo SNP estaba en la Tabla 2. Las tasas de concordancia de análisis repetidos fueron del 100%, excepto
p21
rs3176352 G & gt; C (158/160, 98,75%). Para todos los SNPs, menor frecuencia de los alelos (MAF) en nuestros controles fue similar al MAF para los chinos en la base de datos. En los controles, para estos ocho polimorfismos, las frecuencias genotípicas observadas estaban todos en HWE (Tabla 2).
Las asociaciones entre p21, p53, polimorfismos y el riesgo de CECA y el genotipo TP53BP1 y p73 el análisis combinación
Cuando el
p21 genotipo homocigoto GG
rs3176352 se utilizó como grupo de referencia, el genotipo GC no se asoció con el riesgo para la CECA; el genotipo CC se asoció con un aumento significativo del riesgo para la CECA (CC vs GG: OR ajustada = 1,61 IC 95% = 1.18 a 2.20,
p = 0,0030
). En el modelo dominante, el
p21
rs3176352 variantes GC /CC no se asociaron con el riesgo de CECA, en comparación con el
p21
rs3176352 genotipo GG. En el modelo recesivo, cuando se utilizaron los
p21
rs3176352 genotipos GG /GC como grupo de referencia, el genotipo CC homocigoto se asoció con un mayor riesgo de CECA (CC vs GG /GC 63%: OR ajustada = 1,63; IC del 95% = 1.23 a 2.15,
p = 0,0006
) (Tabla 3).
Cuando el
se utilizó p73
rs1801173 CC genotipo homocigoto como grupo de referencia, el genotipo CT se asoció con un aumento significativo del riesgo para la CECA (TC vs. CC: OR ajustada = 1,39; IC del 95% = 1,10 a 1,76,
p
= 0,006); el genotipo TT no se asoció con el riesgo de CECA. En el modelo dominante, los
CT P73
rs1801173 variantes /TT se asociaron con un riesgo significativamente mayor para la CECA (CT /TT vs CC: OR ajustada = 1,37, 95% CI = 1,10-1,72,
p
= 0,006), en comparación con el
p73
rs1801173 CC genotipo. En el modelo recesivo, cuando el
P73
rs1801173 CC /CT genotipos se utilizaron como grupo de referencia, el genotipo homocigoto TT no se asoció con el riesgo de CECA (Tabla 3).
Cuando
p21
rs1801270 CC homocigotos genotipo se utilizó como grupo de referencia, el genotipo AA se asoció con una disminución significativa del riesgo para la CECA. Cuando el
TP53BP1
rs560191 GG /genotipos GC se utilizaron como grupo de referencia, el genotipo CC se asoció con un riesgo significativamente menor para la CECA (Tabla 3). Los análisis de regresión logística reveló que los
p21
rs2395655 G & gt; A,
p21
rs1059234 C & gt; T,
p21
rs762623 C & gt; A y
p53
rs1042522 G & gt; C polimorfismos no se asociaron con el riesgo de CECA (Tabla 2). Después de la corrección de Bonferroni (número de mutiple test = 32), por
p21
rs3176352 G & gt; C, el ajuste
p = 0,096
para CC vs GG, ajustado
p
= 0,0192 para CC vs. GG /GC. Para
P73
rs1801173 C & gt;. T, el
p
correcta = 0,202 para la TC versus CC después de ajustar por edad y otros,
p
correcta = 0,195 para CT /TT vs CC. Para el resto 6 SNPs, en todos los modelos de comparación, p
Restaurant & gt;.
0,05
cuando
p21
rs3176352 genotipo CC y
P73
rs1801173 CT /TT genotipos fueron considerados como variante genotipos de riesgo. Cuando se utiliza el grupo portador del genotipo sin variante de riesgo como el grupo de referencia, el portador de cualquiera de los grupos genotipo variante de un riesgo (OR ajustada = 1,42; IC del 95% = 1,12 a 1,80,
p = 0,0035
) y tanto el riesgo genotipos variantes grupo de portadoras (OR ajustada = 2,47; IC del 95% = 1,60 a 3,82,
p Hotel & lt; 0,0001) se asociaron con un riesgo significativamente mayor para la CECA
análisis de la estratificación en el p21. rs3176352 G & gt; C y p73 rs1801173 C & gt; T polimorfismo y el riesgo de CECA
para evaluar los efectos de
p21
rs3176352 G & gt; C genotipos sobre el riesgo de la CECA según diversa edad, sexo, tabaquismo y el estado de consumo de alcohol; hemos realizado análisis de la estratificación. Un aumento significativo del riesgo de CECA asociado con el
p21
rs3176352 G & gt; C polimorfismo fue evidente entre todos los subgrupos, excepto en pacientes de sexo femenino después de la estratificación (Tabla S1). Un riesgo significativamente menor de CECA asociado con el
P73
rs1801173 C & gt;. T polimorfismo fue evidente entre los pacientes de edad avanzada, pacientes de sexo femenino y los pacientes que nunca beber o fumar (Tabla S2)
Discusión
En este estudio de casos y controles basado en el hospital de la CECA, se encontró que el
p21
rs3176352 CC y
p73
rs1801173 CT /TT genotipos se asociaron con mayor riesgo de CECA; resultados positivos también fueron observados en el análisis de genotipo combinación. A lo mejor de nuestro conocimiento, esta es la primera asociación positiva de
p21
rs3176352 G /C y
polimorfismos T con el riesgo de la CECA P73
rs1801173 C /.
P21 es un inhibidor de la quinasa dependiente de ciclina. Se ha observado que en una amplia variedad de cánceres, la expresión de p21 se ve alterada. En la fase G1, la proteína p21 altera la progresión del ciclo celular [25], [26]. La unión de la proteína supresora de tumores p53 para la expresión de p21 p21 promotor inducir [27]
P21
rs3176352 G /C (IVS2 + 16 G & gt; C). Se encuentra en el intrón 2 de
p21
, 16 pb aguas abajo del sitio de empalme. Esta transición C-a-G se prevé que afectará a la
p21
ARN mensajero de empalme [28]. Choi
et al.
Demostró que
p21
rs3176352 G /C polimorfismo parecían estar en desequilibrio de ligamiento con Ser31Arg en una población coreana. El análisis de este haplotipo de susceptibilidad al cáncer de pulmón demostró un efecto protector que era dependiente del número de alelos variantes. En un estudio previo que incluyó a 80 pacientes con cáncer de esófago y 200 controles sin cáncer de Ningxia Región de China, el
p21
rs3176352 G /C polimorfismo no se asoció con el riesgo de cáncer de esófago [29]. Un estudio de casos y controles desde el noreste de Irán, con 126 casos y 100 controles, se llevó a cabo para detectar asociaciones de
p21
polimorfismos rs1801270 y rs1059234 () con riesgo de CECA [30]. Los datos sugieren que estos dos
p21
polimorfismos, tanto sola como en combinación, no se EscC biomarcadores de susceptibilidad genética, que está de acuerdo con nuestros resultados.
P73, un homólogo de p53, p53 tiene alguna actividades como y juega un papel importante en la modulación de la reparación del ciclo celular, la apoptosis y el ADN. En una región de alta incidencia de China,
P73
polimorfismos no se asociaron con CECA susceptibilidad [31]. Sin embargo, nuestros resultados son más confiables debido a los números más altos de casos y controles.
P73
rs1801173 C /T polimorfismo méritos más estudios funcionales para dilucidar la etiología de este SNP y la CECA.
Las frecuencias de los polimorfismos genéticos a menudo varían entre los grupos étnicos. En el presente estudio chino, la frecuencia del alelo
p21
rs3176352 C fue de 0,410 en 686 sujetos de control, lo cual es consistente con los valores reportados en la base de datos de SNP de los chinos Han (0.422) y las poblaciones japonesas (0,455) , superior a la de la (0.233) de la población del África subsahariana y la población afroamericana (0.250), y aunque inferior a la de la población europea (0.758). La frecuencia de los alelos de
P73
rs1801173 T fue de 0.230 en 686 sujetos de control, lo cual es consistente con los valores reportados en la base de datos para el SNP poblaciones (chinos Han + japonés) JPT + CHB (0,267), mayor que la del África subsahariana (0.102) de la población y la población europea (0.150).
Este estudio de casos y controles tiene varias limitaciones. En primer lugar, debido a que los pacientes y los controles se inscribieron en los hospitales, el sesgo inherente puede haber dado lugar a resultados falsos. En segundo lugar, los polimorfismos estudiados no pueden proporcionar una visión completa de
p21
,
p53
,
TP53BP1
y
P73
variabilidad genética. Se requieren estudios de multa de cartografía. En tercer lugar, debido al tamaño de la muestra moderada y ausencia de una cohorte de validación, el poder estadístico es limitado. Por último, la infecciones virales y los parámetros inmunológicos información no estaba disponible, por lo tanto el poder de nuestros análisis se restringió.
En conclusión, nuestro estudio proporciona una fuerte evidencia de que
p21
rs3176352 G /C y
p73
rs1801173 C /T polimorfismos pueden contribuir al riesgo de la CECA. Se requieren estudios de caracterización y replicación biológicos específicos de tejido con poblaciones más grandes para confirmar nuestros hallazgos.
Apoyo a la Información sobre Table S1.
análisis estratificado entre los
p21
rs3176352 G & gt; C polimorfismo y el riesgo de la CECA por sexo, edad, tabaquismo y consumo de alcohol
doi:. 10.1371 /journal.pone.0096958.s001 gratis ( DOCX)
Tabla S2.
análisis estratificado entre los
P73
rs1801173 C & gt; T polimorfismo y el riesgo de la CECA por sexo, edad, tabaquismo y consumo de alcohol
doi:. 10.1371 /journal.pone.0096958.s002 gratis ( DOC)
datos S1.
datos de p21, p53, p73 y TP53BP1 polimorfismos
doi:. 10.1371 /journal.pone.0096958.s003 gratis (SAV)
Reconocimientos
Agradecemos a todos los pacientes que participaron en este estudio. Deseamos agradecer al Dr. Chen Yiqun (Biowing Biotecnología Aplicada Company, Shanghai, China) para el apoyo técnico.