Extracto
Antecedentes
La regeneración hepática (LR ) implica una fase de inducción temprana se caracteriza por la proliferación de hepatocitos, y una fase angiogénico retardada que se distingue por la expansión del compartimento no parenquimatosas. El interés en la comprensión del mecanismo de LR se ha desplazado últimamente de la proliferación y el crecimiento de las células del parénquima de la remodelación vascular durante LR. La angiogénesis acompañado por LR ejerce un papel fundamental para llevar a cabo el proceso. Factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF) se ha elucidado como el regulador más dinámico de la angiogénesis. Desde esta perspectiva, derivado de las plaquetas /Intra-plaquetas (IP) de VEGF-A debería estar asociada con LR.
Material y Métodos
Treinta y siete pacientes con diagnóstico de carcinoma hepatocelular y sometidos a hepatectomía parcial ( PH) se inscribieron en el estudio. El suero y el IP de VEGF-A se controló antes de la operación y a las cuatro semanas de PH. volumetría hepática se determinó en modelos informáticos derivados de la tomografía computarizada (TC).
Resultados
El suero y el IP de VEGF-A fue significativamente elevado en cuatro semanas de PH. Preoperatoria IP VEGF-A fue mayor en los pacientes con cáncer avanzado y la invasión vascular. Postoperatoria IP VEGF-A fue mayor después de la resección hepática. Hubo una correlación estadísticamente significativa entre el postoperatorio IP VEGF-A y el futuro volumen hepático remanente. Por otra parte, el receptor-1 del factor de crecimiento endotelial vascular soluble (sVEGFR1) fue claramente el regulado que sugiere una angiogénesis afinarse en la fase posterior de LR.
Conclusión
IP VEGF-A es sobreexpresa durante la fase posterior de LR que sugiere su implicación en la inducción de angiogénesis durante LR
Visto:. Aryal B, Shimizu T, J Kadono, Furoi A, Komokata T, Inoue M, et al. (2016) Un interruptor en la dinámica de Intra-plaquetas VEGF-A de Cáncer a la fase posterior de hígado de regeneración después de la hepatectomía parcial en los seres humanos. PLoS ONE 11 (3): e0150446. doi: 10.1371 /journal.pone.0150446
Editor: Domenico Ribatti, Universidad de la Escuela de Medicina de Bari, Italia
Recibido: 19 Enero de 2016; Aceptado 15 de febrero de 2016; Publicado: 1 Marzo 2016
Derechos de Autor © 2016 Aryal et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan
Disponibilidad de datos:. Todo relevante están disponibles en el apoyo de sus archivos de información en papel y los datos
financiación:.. los autores no tienen ningún soporte o financiación reportar
Conflicto de intereses:. los autores han declarado que no existen intereses en competencia
Abreviaturas: HCC, carcinoma hepatocelular; LR, la regeneración del hígado; PH, hepatectomía parcial; VEGF-A, vascular factor de crecimiento endotelial-A; TACE, quimioembolización arterial transcatéter; RFA, la ablación por radiofrecuencia; IP, intraplaquetario; ALT, alanina aminotransferasa; ALP, fosfatasa alcalina; AST, aspartato aminotransferasa; GGT, gamma-glutamil transferasa; CRP, proteína C reactiva; HGF, factor de crecimiento de hepatocitos; EGF, factor de crecimiento epidérmico; sVEGFR, receptor de VEGF soluble; Ang-1, angiopoyetina-1; IL-6, interleucina-6; TNF-α, factor de tejido necrótico alfa; PDGF-BB, de crecimiento derivado de plaquetas factor de BB; ELISA, ligado a enzima ensayo inmunoenzimático; ICG, verde de indocianina; PRE OP, preoperatoria; Después de la operación, el postoperatorio; RLV, el volumen hepático remanente; FRLV, remanente futuro volumen hepático
Introducción
La regeneración hepática es un fenómeno bien orquestada esencial tanto para la restauración del volumen hepático agudo después de la resección y el mantenimiento de su volumen durante la lesión hepática crónica. Un hígado de regeneración, después de la hepatectomía parcial (PH), requiere la formación de una red compleja de sinusoides hepáticos a través de los cuales fluye la sangre. Por lo tanto, la fase angiogénico es un proceso fundamental de LR, que se produce predominantemente en la fase posterior [1]. Entre los siete miembros del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) (VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-C, y PIGF), VEGF-A se encuentra en la vanguardia de los vasos sanguíneos formación [2, 3]. VEGF-A se conoce como el factor de crecimiento más potente y específico para tanto la angiogénesis como la vasculogénesis [4, 5]. Es importante destacar que, VEGF-A tiene una función reguladora en la diferenciación y crecimiento de las células endoteliales sinusoidales hepáticas (LSECs) [6]. VEGF-A se ha considerado como un jugador angiogénico central de LR [7].
La lesión hepática provoca la captura y la acumulación de plaquetas en el hígado, donde se adhieren al endotelio y esta interacción se considera para activar LSECs por la liberación de diversos factores de crecimiento, incluyendo VEGF-A [8]. Al mismo tiempo, los diferentes factores de crecimiento liberados de las plaquetas activadas también son responsables de los efectos proliferativos sobre los hepatocitos [8]. Notablemente, la reciente
in vitro
estudio sugiere que las plaquetas entregar su contenido de ARN para el hepatocito y esta transferencia de ARN contribuye a la proliferación de hepatocitos mediada por plaquetas [9]. Un nuevo nuevo mecanismo por el que las plaquetas se comunican con su entorno se ha conocido, que implica la
la síntesis de novo de proteínas
[10] en lugar de la captura de la circulación.
plaquetas secretan VEGF-A, como un factor angiogénico robusta, se ha ganado una considerable atención por su papel en la biología del tumor grave [11-14]. Las plaquetas también modulan la cicatrización de heridas y la regeneración de tejidos por la liberación de sus factores de crecimiento como VEGF-A [15]. No debe haber una variación perceptible entre la angiogénesis patológica y fisiológica impulsado por la plaqueta VEGF-A. En este estudio, se evaluó el nivel de IP VEGF-A antes de la operación y a las cuatro semanas de la HP en pacientes con carcinoma hepatocelular (HCC). Como resultado, se observó un nivel significativamente superior de IP VEGF-A a las cuatro semanas de PH. Preoperatoria IP VEGF-A mostró asociación positiva con la progresión del HCC. La IP de VEGF-A nivel se observó prominente durante la fase posterior de LR y la elevación se asoció con el futuro volumen hepático remanente (FRLV).
Pacientes y método
Estudio prospectivo de cohortes
a partir de mayo 2013 a diciembre 2014, 37 pacientes sometidos a resección hepática se inscribieron en el estudio. Para mantener la homogeneidad de la cohorte, sólo los pacientes con carcinoma hepatocelular primario (CHC) se incluyeron en el estudio. El diagnóstico se hace sobre la base de la tomografía abdominal computarizada (CT), resonancia magnética (MRI), alfa-fetoproteína (AFP) y la protrombina inducida por ausencia de vitamina K-II (PIVKA-II). resecciones hepáticas fueron clasificados de acuerdo a la Asociación Internacional Hepato-Pancreato-biliar, Brisbane (IHPBA) 2000 nomenclatura: hepatectomía mayor define como resección de 3 o más de 3 segmentos Couinauds y hepatectomía menor como la resección de menos de 3 segmentos Couinauds
Recogida de muestras
La sangre venosa se recogieron inmediatamente antes de la cirugía (PRE OP) y cuatro semanas después de la cirugía (después de la operación). Recuento sanguíneo completo (CSC) se realizó con un analizador de hematología automatizado Sysmex XE-5000 (Sysmex Corporation, Kobe, Japón).
El Comité de Ética Institucional (Universidad de Kagoshima#24-155 /26-77, de Kirishima Médico centro#2505 y Kagoshima centro Médico#25-30) aprobaron los análisis de las muestras de sangre y datos de los pacientes; Todos los pacientes dieron el consentimiento informado firmado. Los tres comité de ética institucional revisado y aprobado específicamente este estudio. Estudio se realizó de acuerdo con las normas éticas del Comité de Experimentación Humana de la institución en la que se realizaron los experimentos o de acuerdo con las normas éticas de la Declaración de Helsinki de 1975.
Preparación de suero y plasma
Toda la sangre se recoge en el tubo de suero de separación y un tubo de citrato, que contiene 0,5 ml de citrato de sodio, y un tubo de EDTA-2K para recuento de células (Venoject II, Terumo Corp., Tokyo, Japón). tubo de suero se incubó sin perturbaciones a temperatura ambiente durante 30 minutos para permitir la coagulación. Ambos tubos de suero y plasma se centrifugaron a 1710 xg durante 10 minutos.
Los sobrenadantes resultantes fueron cuidadosamente con pipeta, al menos 5 mm por encima del coágulo.
plaquetas Aislamiento
se extrajo sangre en dos tubos de citrato. Los tubos se centrifugaron a 90 xg durante 15 minutos. El plasma rico en plaquetas resultante (PRP) se pipeta suavemente con las precauciones necesarias para evitar la contaminación. A continuación, el PRP se centrifugó a 2810 x g para aislar las plaquetas. se recogió de manera muy precisa el sobrenadante (plasma pobre en plaquetas) y se decanta para la eliminación completa del plasma de los gránulos. gránulos de plaquetas aisladas de cada 200 l de PRP se suspendieron en 220 l de tampón de lisis (cloruro sódico 150 mM, 25 mM Tris-HCl pH 7,6, 1% Tergitol de tipo NP-40, 0,1% de dodecil sulfato de sodio, 1% desoxicolato de sodio ); Después de incubar durante 20 minutos, la solución de lisado se pipeteó y se agitó hasta que los gránulos se disolvieron completamente en la solución
CBC se llevó a cabo en 3 preparaciones:.. sangre entera, PRP y PPP
la cuantificación de los factores de crecimiento y citoquinas
Serum, extractos de plasma y plaquetas se analizaron juntos por disponible comercialmente ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) para pruebas de VEGF-A humano, HGF, el factor de crecimiento epidérmico (EGF), plaquetas factor BB de crecimiento derivado de (PDGF-BB), soluble VEGF receptor-1 (sVEGFR-1) y VEGF soluble receptor-2 (sVEGFR-2), angiopoyetina-1 (Ang -1), la interleucina-6 (IL-6) (Quantikine; R & amp; D Systems, Minneapolis, MN, EE.UU.) y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) (Novex, Life Technologies, Carlsbad, CA, EE.UU.); de acuerdo con las instrucciones del fabricante
Cálculo de IP VEGF-A
contenido de plaquetas de VEGF-A por 10
6 plaquetas se calculó utilizando la ecuación:.
intraplaquetario (IP) de Ang-1 se calculó utilizando la ecuación similar.
las evaluaciones de función hepática
la bilirrubina sérica, albúmina, aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT), fosfatasa alcalina (ALP) , gamma-glutamil transferasa (GGT), alfa-fetoproteína (AFP), proteína C-reactiva (PCR) y el tiempo de protrombina (TP) se midieron como análisis de sangre rutinario.
reserva funcional hepática se evaluó mediante el verde de indocianina (ICG) examen de la depuración, 99mTc-galactosil albúmina de suero humano (GSA) y la gammagrafía puntuación de Child-Pugh
análisis volumétricos hígado preoperatoria se obtuvieron utilizando un analizador de volumen tridimensional (SYNAPSE VINCENT;. FUJIFILM Medical Co., Tokio, Japón). volumen resección o FRLV se expresó en porcentaje. De 37 pacientes, 33 pacientes fueron sometidos a examen volumétrica del hígado y se utilizaron en el análisis con variables detectables después de la operación.
Análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron utilizando Graph Pad Prism (versión 6.0 d para Mac OS X, EE.UU., GraphPad, San Diego California, EE.UU.) y se basa en las pruebas no paramétricas (prueba de Mann-Whitney, prueba de Wilcoxon, y correlación de Spearman). IP VEGF-A e IP nivel de Ang-1 se expresaron por cada 10
6 plaquetas; todos los biomarcadores se muestran gráficamente mediante diagramas de caja y bigotes. Dos colas
Los valores P Red de menos de 0,05 se consideraron estadísticamente significativos.
Resultados
demográficos del paciente
características clinicopatológicas de los pacientes se resumen en la tabla 1. Aunque la cohorte incluyó sólo los pacientes con HCC, la evidencia de la cirrosis no se distribuye de manera uniforme. Todos los pacientes en el estudio pertenecían a la clase Child-Pugh A según la clasificación de Child-Pugh. Diecinueve pacientes recibieron quimioembolización arterial transcatéter preoperatoria (TACE) o ablación por radiofrecuencia (RFA). Ninguno de los pacientes recibió transfusiones de plaquetas intraoperatorias. Tomando preoperatoria IP VEGF-A como referencia, los caracteres de referencia 10 (edad, sexo, etiología, la cirrosis, la estadificación del tumor, tamaño del tumor, la invasión vascular, las intervenciones anteriores, el tipo de resección y AFP en suero) se analizaron. Excepto por el tamaño del tumor, puesta en escena, la invasión vascular y el grupo de resección, se observaron diferencias estadísticamente significativas en las características basales entre los grupos (Tabla 1) guía empresas
IP VEGF-A es elevada en la fase posterior de LR
de manera similar a los hallazgos anteriores, suero contenía el principal grupo de circulación de VEGF-a (
P
= 0,001; r = 0,378; S1A Fig), y el suero de VEGF-a se correlacionó directamente con el recuento de plaquetas (
P Hotel & lt; 0,01; r = 0,302; S1B la figura). Hubo una diferencia marginalmente significativa entre los preoperatorios y postoperatorios recuentos de plaquetas (recuento de plaquetas mediana: PRE OP, 14,80 × 10
4 plaquetas; después de la operación, 16.30 × 10
4 plaquetas;
P =
0,08; S2A la figura), sin embargo, no se observó ninguna diferencia significativa en los recuentos de plaquetas entre el subgrupo de mayor y menor grupo de hepatectomía (recuento de plaquetas mediana: PRE mayor op, 15 × 10
4 plaquetas; PRE OP menor, 14,4 × 10
4 plaquetas;
P = 0,66
y el recuento de plaquetas mediana: después de la operación principal, 15.10 × 10
4 plaquetas; después de la operación de menor importancia, 17,3 × 10
4 plaquetas;
P
= 0,7;. S2B figura)
el estudio se centró en la fase tardía de angiogénico o LR. Suero de VEGF-A se analizó en dos eventos: el preoperatorio y en cuatro semanas después de PH; el nivel postoperatorio de suero VEGF-A fue mayor que la del nivel preoperatorio (mediana suero VEGF-A: PRE OP, 288,4 pg /ml; después de la operación, 377,7 pg /ml,
P
& lt; 0,01; Fig 1A). Del mismo modo, el postoperatorio IP VEGF-A fue significativamente más elevada que la del nivel preoperatorio (mediana IP VEGF-A × 10
6 plaquetas: PRE OP, 0,8612 pg; después de la operación, 1.362 pg,
P
& lt; 0,001; Fig 1C). No hubo diferencia significativa en el nivel de plasma VEGF-A entre los estados preoperatorios y postoperatorios (
P
= 0,495; figura 1B). Estos hallazgos muestran que tanto el suero y IP VEGF-A se eleva a las cuatro semanas después de PH. Se recogieron
muestras antes (PRE OP) y cuatro semanas después de la hepatectomía parcial (POST OP). IP VEGF-A concentración se expresa por cada 10
6 plaquetas. *
P≤0
05
.; **
p ¾ 0,01
; ***
P
≤0.001
Asociación de IP VEGF-A con el tamaño del tumor y RLV
Los pacientes se dividieron en dos grupos.; hepatectomía grupos menores y mayores. La diferencia en las concentraciones de suero y IP VEGF-A se compararon en los dos grupos (Fig 2A y 2B). A pesar de que el nivel preoperatorio de suero VEGF-A en el grupo principal era aparentemente más alto que el del grupo de menor importancia, no se observó diferencia estadísticamente significativa entre los dos grupos (mediana suero VEGF-A: PRE OP importante, 398,0 pg /ml; PRE OP menor, 275,4 pg /ml;
P
= 0,082), pero el suero postoperatorio VEGF-a en el grupo principal fue significativamente mayor que la del grupo de menor importancia (mediana suero VEGF-a: después de la operación importante , 485,0 pg /ml; después de la operación de menor importancia, 345,6 pg /ml;
P Hotel & lt; 0,05)
Diferencia en el suero de (a) y IP VEGF-a (B) en los principales. y grupos hepatectomía menores. Los niveles se compararon antes (PRE OP) y después de cuatro semanas de la hepatectomía parcial (POST OP). Diagrama de dispersión que muestra la correlación entre: preoperatoria IP VEGF-A y el tamaño del tumor (C), IP postoperatorio VEGF-A y el volumen de la resección (D) (expresado en porcentaje). IP VEGF-A concentración se expresa por cada 10
6 plaquetas. *
P≤0
05
.; **
p ¾ 0,01
; ***
P
≤0.001
IP VEGF-A siguió una tendencia similar como el suero de VEGF-A.; como se muestra en la figura 2B, preoperatoria IP VEGF-A de nivel en el grupo principal fue significativamente mayor que la de la menor (mediana IP VEGF-A × 10
6 plaquetas: PRE OP principales, 1.362 pg; PRE menor op, 0,619 pg;
P Hotel & lt; 0,01). El IP postoperatoria VEGF-A en el grupo principal fue significativamente elevado en comparación con el grupo de menor importancia (mediana IP VEGF-A × 10
6 plaquetas: Post Op principales, 1.938 pg; después de la operación de menor importancia, 0.786 pg;
P Hotel & lt; 0,001). En el subgrupo de grupo menor, IP VEGF-A fue significativamente elevado después de la operación (mediana IP VEGF-A × 10
6 plaquetas: PRE OP menores, 0.619; después de la operación de menor importancia, 0.786:
P Hotel & lt; 0,01). A pesar del hecho de que el 75% de los casos había postoperatorio elevado IP-VEGF en el grupo mayor, estadísticamente sólo observamos una diferencia significativa marginal entre el preoperatorio y postoperatorio IP-VEGF A en el subconjunto principal (mediana IP VEGF-A × 10
6: plaquetas. PRE OP principales, 1.362, pg /ml; después de la operación principal, 1.938 pg /ml:
P
= 0,09)
Además, se analizaron específicamente la correlación entre el tumor tamaño y preoperatoria IP VEGF-A. La relación entre el porcentaje de volumen de resección y postoperatoria IP VEGF-A se analizó para comprobar el impacto de RLV sobre IP VEGF-A secuestro. Se encontró una correlación significativa entre el preoperatorio IP VEGF-A y el tamaño del tumor (
P Hotel & lt; 0,01; r = 0,4789; Figura 2C); Del mismo modo IP postoperatorio VEGF-A y el volumen de la resección también mostraron una correlación estadísticamente significativa (
P
& lt; 0,01; r = 0,452; Fig 2D). Estos hallazgos demuestran que el volumen de IP VEGF-A está asociada con el tamaño del tumor y el volumen resecado.
Asociación de Pro-inflamatoria de citoquinas IL-6 en IP VEGF-A secuestro
Estudios anteriores han se muestra el papel de la IL-6 en VEGF-a de producción [16, 17]. De los 37 casos, IL-6 fue detectable en el suero postoperatoria en 25 pacientes. El nivel sérico postoperatorio IL-6 fue significativamente elevado en comparación con el nivel preoperatorio (suero mediana de IL-6: PRE OP, 0 pg /ml; después de la operación, 4.246 pg /ml;
P Hotel & lt; 0,01; figura 3A). Sin embargo, el suero de TNF-α nivel estaba por debajo del rango detectable en ambas muestras preoperatorios y postoperatorios (Fig 3B).
Las concentraciones séricas de IL-6 (A) y TNF-α (B) se analizaron antes de la operación (PRE OP) y cuatro semanas después de la hepatectomía parcial (después de la operación). Concentraciones séricas de IL-6 en mayor y menor grupo de hepatectomía (C) (N = 25). Correlación entre la IL-6 en suero después de la operación elevada y IP VEGF-A (D). Correlación entre postoperatorio IP VEGF-A y el volumen de la resección (E) (expresado en porcentaje). IP VEGF-A concentración se expresa por cada 10
6 plaquetas (N = 25). *
P≤0
05
.; **
p ¾ 0,01
; ***
P
≤0.001. ND = No detectado
En comparación con el grupo de hepatectomía menor, el grupo de hepatectomía importante demostraron una elevación más pronunciada de suero IL-6 (suero mediana IL-6:. Major, 10,18 pg /ml; menor , 4,70 pg /ml;
P
& lt; 0,05) durante LR como se ilustra en la figura 3C. La elevación de suero de IL-6 es obvia durante varios días después de una cirugía importante, sin embargo, la elevación de la IL-6 en un mes de hepatectomía no estaba prevista. Se encontró una correlación estadísticamente significativa entre la IL-6 y postoperatoria IP VEGF-A (
P Hotel & lt; 0,05;
r = 0,4905
; la figura 3D). Además, la correlación significativa entre el suero de IL-6 postoperatorio y el porcentaje de resección volumen (
P
& lt; 0,05;
r
= 0,459; Fig 3E) corresponde a la asociación similar de IP VEGF -A y la extensión de la resección. Tomados en conjunto, IL-6 se encuentra para ser elevado después de cuatro semanas de PH, y se correlaciona con IP VEGF-A.
Otros factores de crecimiento derivados Platetet tono mayor mitógenos y no están elevados en la fase posterior de LR
factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) y factores de crecimiento epidérmico (EGF) son los principales mitógenos; la brecha en las vías de señalización asociadas con estos factores es probable que abolir el proceso de LR [18]. No se encontró estadísticamente cambio significativo en las concentraciones séricas de HGF entre las fases preoperatorios y postoperatorios (mediana HGF en suero: PRE OP, 2401 pg /ml; después de la operación = 2565 pg /ml;
P = 0,511
; la figura 4A) . Serum EFG se secreta en gran medida por las plaquetas. También se encontró una correlación positiva significativa entre el recuento de plaquetas y EGF suero (Fig S3 A). El suero EGF tampoco dió una diferencia significativa entre las dos fases (EGF sérica mediana: PRE OP = 291,3 pg /ml; después de la operación = 287,5 pg /ml;
P
= 0,40; Figura 4B). De plaquetas factor de crecimiento derivado de (PDGF) -BB, conocido como el más potente mitógeno para la proliferación de células estrelladas hepáticas, se produce sustancialmente por las plaquetas. No es sorprendente que el suero de PDGF-BB se correlacionó positivamente con el recuento de plaquetas (
P Hotel & lt; 0,001; r = 0,41; S3 B figura). No se encontró una diferencia significativa en la concentración sérica de PDGF entre los estados preoperatorios y postoperatorios (suero mediana de PDGF-BB: PRE OP de 1912 pg /ml; después de la operación de 2178 pg /ml;
P =
0,30; Fig. 4C)
La concentración sérica de las principales mitógenos, HGF (A) y EGF (B) se analizaron antes de la cirugía (PRE OP) y cuatro semanas después de la hepatectomía parcial (después de la operación). La concentración sérica de PDGF-BB (C) y Ang-1 (D) se analizaron antes de la cirugía (PRE OP) y 4 semanas después de la cirugía (después de la operación).
A continuación, se evaluó angiopoyetina (Ang ) -1 como otro marcador importante de la angiogénesis durante LR [19]. Una parte importante de suero Ang-1 se deriva de la de plaquetas [20]. Se encontró una correlación directa entre la Ang-1 en suero y el recuento de plaquetas (
P Hotel & lt; 0,01; r = 0,32; S3C figura). Sorprendentemente, no se observó ninguna diferencia significativa en el nivel de suero de Ang-1 entre las fases preoperatorios y postoperatorios (Ang1 sérica mediana: PRE OP = 24504; postoperatorio = 25449 pg /ml;
P
= 0,79; Figura 4D) . Además, el análisis de IP Ang-1 a partir de las plaquetas aisladas tampoco demostró ninguna diferencia significativa entre los valores preoperatorios y postoperatorios (mediana IP Ang1 × 10
6 plaquetas: PRE OP = 13688 pg /ml; después de la operación = 15262 pg /ml;
P = 0,676
; S3D figura). En conjunto, estos hallazgos sugieren que existe una elevación selectiva de VEGF-A en la fase posterior de LR.
agotamiento en el nivel de VEGF Soluble Receptor-1 en la fase posterior de LR inversamente correlacionado con la resección Volumen
receptores de VEGF solubles determinar el nivel de VEGF circulante-A [21]. Nuestros resultados representan una unidad angiogénico en curso de un mes de la hepatectomía. Se ha observado una disminución significativa en el nivel de sVEGFR1 postoperatoria que la del preoperatorio (mediana sVEGFR1: PRE OP, 189,6 pg /ml; después de la operación, 124,3 pg /ml;
P Hotel & lt; 0,0001; figura 5A) . A diferencia de sVEGFR1, no se observan diferencias significativas en el nivel de sVEGFR2 suero entre los dos eventos (mediana sVEGFR2: PRE OP, 7773 pg /ml; después de la operación, 8306 pg /ml;
P = 0,976
; la figura 5B). No se observó ninguna asociación directa entre los receptores de VEGF solubles e IP VEGF-A. Sorprendentemente, sin embargo, la fuerte caída en el nivel de sVEGFR1 (delta sVEGFR1) se correlacionó inversamente con el volumen de la resección (
P. & Lt; 0
05; r = -0.3620
; la figura 5C) .
VEGF soluble receptor-1 (A) y soluble VEGF receptor-2 (B) evaluaron antes de la cirugía (PRE OP) y cuatro semanas después de la hepatectomía parcial (POST OP). Correlación entre delta sVEGFR-1 y el volumen de la resección (C). *
P≤0
05
.; **
p ¾ 0,01
; ***
P
≤0.001, ****
P Hotel & lt; 0,0001
Discusión
Se han reportado dos fases distintas de LR después de PH:. Una fase de inducción temprana con la rápida proliferación de los hepatocitos, seguido de una fase angiogénico que se distingue por la expansión de la no compartimento del parénquima. Nuestro estudio examinó IP VEGF-A en la fase posterior de LR.
pool de suero Major de VEGF-A se atribuye a las plaquetas activadas en los cánceres y otras patologías [12, 13, 22]. Serum VEGF-A por el recuento de plaquetas se ha estudiado en pacientes con HCC, que ilustra su asociación con la progresión de la enfermedad [13]. Nuestro estudio analizó el contenido de VEGF-A real en plaquetas aisladas de pacientes con HCC y observa su asociación con la progresión del cáncer. Existe una amplia evidencia de que las plaquetas participan directamente en el crecimiento tumoral, la angiogénesis y la metástasis. Los efectos adversos de las plaquetas en HCC se deben a los factores de crecimiento secretados a partir de sus gránulos [23] esencialmente. Además, otro estudio ha sugerido que VEGF puede mejorar LR después de PH [8]. En particular, hemos demostrado la elevación prominente de suero y IP VEGF-A en una fase remota de LR. Nuestros hallazgos adelante una visión sobre IP doble papel de VEGF-A en HCC y LR.
herida quirúrgica induce la iniciación de reacciones locales y sistémicas, en las plaquetas activadas secretan diversos factores de crecimiento para reparar las estructuras lesionadas [15] . Análisis en la primera fase después de una cirugía mayor no se refleja únicamente la respuesta a LR plaquetas, como la cicatrización de heridas quirúrgicas está activo durante las primeras semanas de funcionamiento. Bondestam J et al. [24] observó elevación de suero de VEGF-A después de una cirugía mayor en la primera y tercera día postoperatorio, pero no en las muestras posteriores. En el estudio actual, las citoquinas se analizaron cuatro semanas después de la cirugía, cuando el nivel de PCR ya había vuelto a la normalidad (S4 figura), reduciendo al mínimo las posibilidades de solapamiento entre la respuesta plaquetas para la curación de la herida quirúrgica y LR. Una regeneración activa con una mayor actividad mitótica se ha demostrado hasta 10-35 días después de la hepatectomía en hígados normales, mientras que los hígados con cirrosis o hepatitis mostraron evidencia histológica de regeneración durante los dos primeros meses [25]. Aunque el mayor volumen se regenera en un mes, LR continúa durante todo el primer año postoperatorio [26]. La mayoría de los fallos hepáticos postoperatorias se sabe que ocurren dentro de un mes de la resección hepática [27]. Cuatro semanas después de PH es un período decisivo de la LR. Por otra parte, el objetivo de este estudio fue examinar el VEGF-A IP en la fase posterior de la angiogénesis LR cuando se supone que es más prominente.
Los niveles circulantes de los principales mitógenos de la proliferación de los hepatocitos, HGF y EGF [18], no mostraron cambios significativos en el suero a las cuatro semanas de PH. Otros factores angiogénicos principales, EGF, Ang-1 y PDGF-BB, considerado esencial en LR [19], son secretados por las plaquetas en gran medida [20]. PDGF-BB es conocida por su potente efecto proliferativo sobre las células estrelladas hepáticas [28]. Sin embargo, la falta de cambios significativos en el nivel de los principales factores de crecimiento, incluyendo las derivadas de las plaquetas en sí refleja el potencial perpetua de IP VEGF-A en la modulación de la angiogénesis durante la fase posterior de LR.
Los dos principales pro-inflamatorias citocinas IL-6 y TNF-α son responsables de forma centralizada para la activación de STAT-3, NF-kB, phosphoinositide 3-quinasa (PI3K) y Akt durante LR [29, 30]. La deficiencia de una de estas citoquinas en las células de la sangre derivados de la médula ósea significativamente afectada LR en ratones [31]. La relación entre la IL-6 y VEGF-A de producción ya se ha establecido en diferentes modelos de células [16, 17, 32]. Que la expresión de VEGF-A es regulada por la IL-6 en la línea celular humana megacarioblástica MEG-01 [33] indicaciones especulación de que IP VEGF-A puede derivar de los megacariocitos. Excepto por su capacidad proliferativa en la fase temprana de LR, IL-6 podría mejorar la angiogénesis durante la fase posterior de LR mediante la promoción de IP VEGF-A de producción.
Los niveles circulantes de sVEGFR1 determinan esencialmente las funciones fisiopatológicos de VEGF a ya que se une para liberar VEGF-a, la reducción de la cantidad real de unión al endotelio [34]. Además, sVEGFR1 como un agente antiangiogeneic reduce significativamente el número de LSECs después de PH, suprimiendo así LR [35]. La angiogénesis se basa en un equilibrio entre reguladores positivos y negativos endoteliales [36]. La supresión de sVEGFR1 observó en nuestro estudio refleja una angiogénesis afinado durante la fase posterior de LR.
La evidencia clínica de las plaquetas como inductor correspondiente de LR se ha demostrado en seres humanos [37, 38]. No se observó acumulación intrahepática de las plaquetas en modelos de ratones [39]; en un estudio más reciente, Starlinger et. al [38] han informado de que las plaquetas se acumulan selectivamente en el sitio de LR después de PH en sujetos humanos. Aunque el mecanismo subyacente de la acumulación intrahepática no se entiende completamente, se presume que un disparador potencial de migración de las plaquetas y la captura en el hígado podría ser las alteraciones hemodinámicas generados en el hígado remanente por el procedimiento quirúrgico. La activación de las plaquetas puede ser provocada por la propia tensión de cizallamiento o mediante la unión a un receptor unido a la membrana aún no identificado en CESH o hepatocitos de plaquetas, o por internalización de plaquetas [8]. Independientemente del mecanismo subyacente sólido, ahora se reconoce que la acumulación intrahepática de plaquetas después de la lesión tiene un efecto mitogénico en LR. Las plaquetas efecto proliferativo sobre las células del hígado se atribuye a la liberación de su factor de crecimiento de plaquetas y la transferencia de ARN [9].
En nuestro estudio, a pesar de que la mayoría de los pacientes tenían un recuento de plaquetas postoperatorio elevada, no había estadísticamente diferencias significativas entre los recuentos de eventos pre y postoperatorias, ni había ninguna diferencia obvia observada entre el recuento de plaquetas de mayor y menor grupo (Fig S2). Dependiendo del RLV, sin embargo, cada uno de plaquetas se cargó con una cantidad en exceso de VEGF-A. La IP de VEGF-A, que se describe como el exceso de cáncer [11-14], se demuestra aquí para ser mucho más alto después de un mes de PH
. En una gran cohorte de pacientes con cáncer gástrico, la resección radical de la tumor resultó en una disminución significativa en el suero preoperatorio VEGF-a en un período de 30 días [40]. En otro estudio, el suero de VEGF-A en relieve para los primeros 3-5 días, pero no en días posteriores después de la cirugía cardiovascular mayor en pacientes sin cáncer [24]. Por el contrario, hemos encontrado elevación sustancial de la concentración de VEGF-A en un mes de PH, lo que indica su relevancia para la fase posterior de LR. Como limitación de nuestro estudio, el grado de neo-angiogénesis no fue evaluado en la pieza de resección hepática o la regeneración. Sin embargo, la elevación prominente en IP VEGF-A junto con la concentración significativa baja regulación de neutralizar sVEGFR1 mantiene un ambiente pro-angiogénicos sostenida para la neovascularización durante la fase posterior de LR.
VEGF-A, hasta reguladas en diversos cánceres, están estrechamente correlacionados con las características patológicas del tumor, la metástasis y el pronóstico. Nuestros resultados mostraron asociación de IP VEGF-A con el tamaño del tumor HCC, el estadio y la invasión vascular. En conjunto, estos resultados sugieren que preoperatoria IP VEGF-A podría representar un potencial predictor de la progresión de HCC. Por otro lado, la angiogénesis acompañado por LR es indispensable para la regeneración sostenida. Múltiples factores angiogénicos se requiere lo siguiente resección hepática o lesión hepática, y VEGF-A como un mitógeno pro-proliferativa es esencial durante LR. Por otra parte, un estudio reciente ha indicado una asociación importante entre versiones defectuosas de plaquetas VEGF-A y disfunción hepática después de PH en los seres humanos [38]. VEGF-A se comporta predominantemente como un mitógeno completo para LSECs [41]. Encontramos selectiva elevación de VEGF-A en la fase tardía de LR, mientras que otros mitógenos principales pro-proliferativos como HGF, EGF, Ang-1 y PDGF-BB no cambiaron significativamente con el nivel preoperatorio.