Entradas no se incluyeron en algunos de la proteína de fusión, puesto que tanto el extremo en-terminal de la parte de anticuerpo y el C-terminal de WALK son esenciales para la unión al antígeno o el receptor, respectivamente. Este enfoque entregado anticuerpo combinación scFv62-TRAIL en la estructura trimérica activo protegiendo al mismo tiempo la capacidad de unión del término antibody.KV10.1 se examinó en numerosas líneas celulares de próstata y las células DU145 fueron verificadas por nosotros como KV10.1 línea celular de cáncer de próstata buena . Sorprendentemente, hemos detectado KV10.1, además, en los epitelios de próstata normal apariencia cells.The KV10.1 de los tejidos es, probablemente, un impacto del virus SV40 immortalization.Dasatinib
Inicialmente se empleó un análisis de la estructura de 96 pocillos para el activo caspasa 3/7. generación de la caspasa-3 no está relacionada con TRAIL en la frase scFv62-TREK, ya que también se detecta en las formulaciones scFv62. Análisis adicionales de apoptosis se realizaron con anexina /PI tinción y citometría de flujo, un proceso independiente activa la caspasa-3. Es improbable que la existencia de la caspasa-3, mientras que en los sobrenadantes es responsable de la inducción de la apoptosis, debido a la apoptosis no fue inducida por la preparación scFv62, mientras que también contiene la caspasa-3.TRAIL mata selectivamente una variedad de líneas de células tumorales sin afectar la gran mayoría de las células normales de la apoptosis. El proceso de apoptosis TRAIL funciona de forma independiente de p53, que hace que sea un sistema con posibilidades de éxito contra los tumores quimio o estéreo resistente. La citotoxicidad y la supervivencia mejorada si no el crecimiento de las células tumorales tolerantes afectada la utilización científica de sTRAIL.
Los tratamientos de combinación están acostumbrados a vencer la oposición y sensibilizar a las células cancerosas resistentes para apoptosis.Nevertheless inducida por TRAIL, la corta vida media y el aclaramiento rápido torrente sanguíneo son desventajas de sTRAIL in vivo. Nuestra anticuerpo TRAIL scFv62- reveló una vida media de ~ 72 m en suero de ratón a 37 ° C, adecuada para su uso in vivo. El envenenamiento de TRAIL reclamado al tejido epitelial normal de la próstata es al parecer un problema de los agregados de alto peso molecular que se derivan de sistemas microbianos forma de frases y no debería ser un problema con nuestra planificación. El uso de células CHO-K1 hemos sido capaces de comunicarse plegada de forma precisa y sin agregados de concreto proteins.Different líneas celulares de cáncer de próstata scFv62 de pista hemos caracterizado en cuanto a su susceptibilidad a TREK. Se seleccionaron las células DU145 debido al nivel de expresión KV10.1 superior y su oposición a la reconocida apoptosis.As inducida por TRAIL manipular células se aplicó la línea de células epiteliales normales PNT2 además de la KV10.1- LNCaP y PC3 líneas celulares negativas. Todos trataron líneas celulares son comparativos frente a dosis bajas de los sistemas inmune scFv62 - mezcla PISTE montar como un solo agente, como se informó anteriormente por otro anticuerpo -path constructs.Fingolimod
La resistencia del tejido de melanoma está mediada por numerosos defectos dentro de la pista ruta de señalización, por ejemplo, La regulación por disminución de los receptores de muerte, las variaciones en el proceso mitocondrial o sobre-expresión de proteínas antiapoptóticas, como c-CHANGE o estudios XIAP.Several ponen de relieve la necesidad de agentes para potente apoptosis PATH-inducida y prevención contra el avance de la resistencia a la sensibilización. Nos dimos cuenta de una fuerte apoptosis, mientras que el KV10.1, la inducción dentro de los veinte h en las células DU145, y trataron las células de la próstata que tienen scFv62-TRAIL en combinación con CHX - cáncer de células epiteliales normales y negativas no se vio afectado. Por otra parte, los ensayos de parada firmemente indicaron que cada uno sosteniendo a Kv10.1 para la superficie de la célula y se confirmó la especificidad de scFv62, y un TREK activo deben estimular -TREK apoptosis. Esta observación apoya nuestra idea esencial de la focalización KV10.1-selectiva de las células cancerosas a través de anticuerpos centrada therapies.We estudió, además, el A375 línea celular de cáncer, que expresa KV10.1 y ha explicado que ser sensible para la caminata se fusionó a un anticuerpo.