Pregunta
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Pregunta -
¿cuáles son los métodos de ensayo de TGO, TGP y fosfatasa alcalina
respuesta -
¿qué es lo que quiere decir con principios como indicación, métodos, composición u otra cosa por favor especifique para responder adecuadamente a su pregunta
gracias
respuesta
Hay dos métodos comunes de determinación de la actividad de una enzima. Un tiempo de parada
de ensayo y un ensayo en tiempo real. Un ensayo de tiempo de parada es sólo eso, se inicia la reacción y dejar de leer o Los Sims resultados en un momento dado. Esta es la manera más fácil de hacer muchos ensayos a la vez, pero hay dos cosas que
deben tenerse en cuenta antes de hacer este tipo de ensayo. En primer lugar es el lineal del ensayo. En
otras palabras, en el momento en que estoy de empezar el ensayo, es el producto que se produce (o sustrato StrawberryNET.com convertido) a una velocidad lineal. Si las condiciones del tubo de ensayo son tales que los reactivos gratis (sustrato) se agotan o los productos que están inhibiendo la enzima, entonces no puede utilizar este ensayo.
En segundo lugar, es el compuesto que está midiendo lo suficientemente estable como para esperar a leer y son las condiciones utilizadas
para detener la enzima, es decir, ácido o base demasiado duro para mantener la estructura de la lectura? Estaremos
haciendo ensayos en tiempo real. Es decir, el cambio en la absorbancia (también conocido como densidad óptica? OD) en función del tiempo.
De este gráfico (hecho en el espectrofotómetro) tendrá que elegir una región que es razonablemente lineal y
determinar el Departamento de Defensa /min y luego convertirlo a unidades de actividad enzimática por ml.
fosfatasas alcalinas son un grupo de isoenzimas con una capacidad común para hidrolizar enlaces éster fosfatasa orgánicos en un medio alcalino, la generación de un radical orgánico y un fosfato inorgánico. Su función biológica es desconocido. La fosfatasa alcalina en el suero normalmente viene desde el hígado y los huesos y, durante el embarazo, de la placenta. También está presente en algunos tumores (por ejemplo, carcinoma broncogénico). El crecimiento óseo en niños provoca un aumento dependiente de la edad en los valores normales, especialmente en los lactantes de & lt; 2 años. A partir de entonces, la actividad de la fosfatasa alcalina disminuye, alcanzando niveles adultos normales después de un brote durante el crecimiento de los adolescentes. Se aumentó ligeramente en las personas mayores. Durante el embarazo, los niveles séricos se elevan dos a cuatro veces por el 9º mes y luego vuelven a la normalidad a los 21 días después del parto.
fosfatasa alcalina aumenta notablemente en las enfermedades que alteran la formación de bilis (colestasis) y en menor medida en la enfermedad hepatocelular. Los valores en la colestasis, ya sea por causas intrahepáticas (cirrosis biliar primaria, enfermedad hepática inducida por fármacos, rechazo de trasplantes de hígado) o enfermedad de injerto contra huésped (EICH), serán igualmente elevado y menos distinguible de causas extrahepáticas (obstrucción de la vía de estenosis , piedra, o tumor), todo se eleva unos cuatro veces. En la enfermedad hepatocelular (por ejemplo, diversas formas de hepatitis, cirrosis, trastornos infiltrantes), los niveles tienden a ser menores con algún solapamiento. elevaciones aisladas (las otras pruebas hepáticas son normales) se producen en la enfermedad granulomatosa o focal hepática (por ejemplo, abscesos, infiltración neoplásica, o la obstrucción del conducto biliar parcial). En algunos tumores malignos extrahepáticas sin metástasis hepática, la causa es oscura: carcinoma broncogénico puede producir su propia fosfatasa alcalina; hipernefroma en el 15% de los casos induce una hepatitis inespecífica como el presunto origen de la elevación de las enzimas. Para el linfoma de Hodgkin, la causa de la elevación aislada de la fosfatasa alcalina se desconoce. Generalmente, una elevación aislada de la fosfatasa alcalina encuentra en un adulto sin otros síntomas, especialmente si personas de edad avanzada, no vale la pena investigar.
técnicas que utilizan la inactivación por calor o electroforesis puede distinguir hueso vs. origen hígado para la fosfatasa alcalina, pero usando otra enzima sérica proporciona una discriminación más simple: 5'-nucleotidasa es un grupo de fosfatasas que difieren bioquímicamente de alcalina fosfatasa; que catalizan la hidrólisis de nucleótidos (por ejemplo, adenosina 5'-fosfato) para liberar el fosfato inorgánico a partir de la posición 5 'y están restringidas a las membranas plasmáticas de las células hepáticas. Esta enzima aumenta en hepatobiliar, pero no hueso, enfermedades. En la práctica, es útil para evaluar el paciente anictérica. Los valores son bajos en la infancia, aumentan gradualmente durante la adolescencia, y la meseta después de la edad de 50 años. 5'-nucleotidasa Normalmente se eleva en algunas mujeres durante el último trimestre del embarazo. Debido a su especificidad para la enfermedad hepática, 5'-nucleotidasa ofrece alguna ventaja sobre la fosfatasa alcalina, pero tampoco puede diferenciar obstructiva de la enfermedad hepatocelular. Pueden o no pueden subir y bajar en paralelo.
Gamma-glutamil transpeptidasa (o gamma-glutamil transferasa --GGT) es una enzima (presente en el hígado, páncreas y riñón) que transfiere el grupo gamma-glutamil de un péptido a otro péptido o para un L-aminoácido. Los niveles de GGT se elevan en enfermedades hepatobiliares y pancreáticas que obstruyen el conducto común, pero son normales en el embarazo y la enfermedad de los huesos. Los niveles de GGT son paralelos a los de la fosfatasa alcalina y 5'-nucleotidasa en condiciones de colestasis. Debido a que no es elevada fisiológicamente durante el embarazo o la infancia, GGT tiene aquí un papel en la detección de la enfermedad hepatobiliar. Las drogas y la ingesta de alcohol, que inducen las enzimas microsomales, también elevar GGT; solo, es un marcador pobres para la enfermedad hepática alcohólica. En combinación con las transaminasas, la detección del abuso de alcohol se convierte en más seguro. La sensibilidad extrema (superior a la fosfatasa alcalina) de esta enzima limita su utilidad, pero la prueba está reemplazando 5'-nucleotidasa, para detectar la enfermedad hepatobiliar como la causa de un aumento aislado de la fosfatasa alcalina.
transaminasas aspartato transaminasa: (AST SGOT --formerly) está presente en el corazón, el músculo esquelético, cerebro y riñón, así como el hígado. los niveles de AST también aumentan en MI, insuficiencia cardíaca, lesión muscular, enfermedad del SNC y otros trastornos no hepáticos. A pesar de cierta falta de especificidad, los niveles altos indican una lesión celular hepática. Los valores de & gt; 500 IU /L (& gt; 400 u./mL) sugieren hepatitis viral o tóxica aguda. Tales valores altos también se producen en la insuficiencia cardíaca marcada (hepatitis isquémica) e incluso con cálculos del colédoco. La magnitud de la elevación no tiene valor pronóstico y no se correlaciona con el grado de daño hepático. AST es fiable y parte de detección de rutina para la enfermedad hepática. Las pruebas seriadas proporciona un buen seguimiento: Una caída a la normalidad indica la recuperación a menos asociado con las etapas finales de la necrosis hepática masiva.
La alanina aminotransferasa (ALT SGPT --formerly) se encuentra principalmente en las células del hígado y por lo tanto tiene una mayor especificidad para la enfermedad hepática, pero ofrece poca otra ventaja. En la mayoría de las enfermedades del hígado, el aumento de AST es menor que la de ALT (AST /ALT relación & lt; 1), excepto en la lesión hepática relacionada con el alcohol en donde la relación de frecuencia es & gt; 2. (La base para ello es la mayor necesidad de piridoxal 5'-fosfato como cofactor para ALT; este cofactor es deficiente en el alcohólico, lo que limita el aumento de la ALT.) Muchos excepciones limitan la viabilidad de la relación. Sin embargo, una proporción & gt; 3 con un aumento desmesurado de la GGT (& gt; 2 veces la fosfatasa alcalina) es muy sugerente.
láctico deshidrogenasa: LDH, comúnmente incluidos en el análisis automatizado, es insensible como un indicador de daño hepatocelular, pero es mejor como marcador de hemólisis o IM. Podría ser muy altos en los tumores malignos que afectan al hígado.
La medición de la actividad fosfatasa se basa en el trabajo de Brandenberger y Hanson (1953) y Hofstee (1954). El efecto catalítico de la enzima en la velocidad inicial de hidrólisis de fosfato de o-carboxifenil se determina. El ácido salicílico, a diferencia del éster de fosfato, absorbe la luz máxima a aproximadamente 300 nm; por lo tanto, la velocidad de hidrólisis puede ser determinado por el aumento de la absorbancia. Una unidad hidroliza un micromol de fosfato o-carboxifenil por minuto a 25 癈 y pH 8,8 en las condiciones especificadas.
Reactivos
0,1 M Tris⋅HCl, pH 8,5 Glicina 0,2 M
, pH 8,8
0,05 M de cloruro de magnesio
3,65 mM o-carboxifenil fosfato (OCPP)
Enzyme
se disuelven a un mg /ml en 0,1 M Tris-HCl, pH 8,5 (solución de la ). Una dilución adicional puede ser necesaria después de la activación.
Procedimiento
activar la enzima mediante la incubación de la solución mg /ml durante 20-30 minutos en un baño de agua 25 癈.
ajustar el espectrofotómetro a 300 nm y 25 癈
Pipetear en cada cubeta de la siguiente manera:.
glicina 0,2 M, pH 8,8 2,0 ml
3,65 mM OCPP 1,0 ml
0,05 M de MgCl2 0,5 ml
Incubar en espectrofotómetro a 25 癈 durante 3-4 minutos para alcanzar el equilibrio térmico y establecer la tasa en blanco, si los hubiere. Añadir 0,1 ml de la solución madre y el aumento récord A300 /minuto de la parte lineal inicial de la curva.
Cálculo
Danil Hammoudi.MD
http://sinoemedicalassociation.com
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Esta es sólo con fines educativos. No se pretende sustituir la consulta y examen físico por parte
médico u otro profesional de la salud